Fd-谷an酸合成酶(Fd-GOGAT)試劑盒,微板法

Fd-谷an酸合成酶(Fd-GOGAT)試劑盒,微板法

Fd-谷an酸合成酶(Fd-GOGAT)試劑盒,微板法

一、產(chǎn)品簡介： 谷*酸脫氫酶廣泛分布于生物體中，在氨同化和轉(zhuǎn)化成有機氮化合物的代謝中起重要作 用。其輔酶是 NADH 或 NADPH，在動植物種兩種輔酶都有存在，而以 NADH-谷*酸脫氫 酶（EC 1.4.1.2）活力為主。 本試劑盒提供一種快速靈敏的檢測方法，樣品中的 NADH-谷*酸脫氫酶特異性作用于底 物谷*酸并產(chǎn)生 NADH，同時與顯色劑反應(yīng)生成黃色物質(zhì)，該物質(zhì)在 450nm 處有吸收 峰，進而得到 NADH-GDH 的酶活性大小。 二、試劑盒的組成和配制： 試劑名稱 規(guī)格 保存要求 備注 提取液 液體70mL×1瓶 4℃保存 試劑一 液體10mL×1瓶 4℃保存 濃度為1M 試劑二 液體5mL×1瓶 4℃保存 試劑三 液體2.2mL×1支 4℃保存 標(biāo)準(zhǔn)品 粉劑mg×1支 4℃保存 若重新做標(biāo)曲，則用到該試劑 注：粉劑量在 mg 級別，使用前用手甩幾次或者進行離心，打開直接加入要求的試劑即可。 三、所需的儀器和用品： 可見分光光度計、1mL 玻璃比色皿（光徑 1cm）、臺式離心機、水浴鍋、可調(diào)式移液器、 研缽、冰和蒸餾水。 四、NADH-谷*酸脫氫酶（NADH-GDH）活性測定： 1、樣本制備： ① 組織樣本： 稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液，進行冰浴勻漿。12000rpm 4℃離心 10min，取上清 液，置冰上待測。（或按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例進行提取） ② 細菌/細胞樣本： 先收集細菌或細胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；取 500 萬細菌或細胞加入 1mL 提取液； 超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次）；12000rpm 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。（或按照細菌或細胞數(shù)量（104個）：提取液體積（mL） 為 500~1000：1 的比例進行提取） ③ 液體樣本：直接檢測。 2、上機檢測： ① 可見分光光度計預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長至 450nm，蒸餾水調(diào)零。 ② 在 1mL 玻璃比色皿（光徑 1cm）中依次加入： 試劑名稱（μL） 測定管 提取液 320 試劑一 200 試劑二 80 樣本 160 試劑三 40 混勻，立即 450nm 下讀取 A1 值，15min 后讀取 A2 值。ΔA=A 2-A1。