土壤硝酸還原酶(S-NR)試劑盒,微板法

土壤硝酸還原酶(S-NR)試劑盒,微板法

土壤硝酸還原酶(S-NR)試劑盒,微板法

本試劑盒僅供科研使用 1 土壤硝酸還原酶（Solid-Nitrate Reductase，S-NR）試劑盒說明書 (貨號：WS9030W 微板法 48 樣) 一、產(chǎn)品簡介： 土壤硝酸還原酶可以把土壤中的硝酸鹽轉(zhuǎn)變?yōu)閬喯跛猁}，然后再通過亞硝酸還原酶的作用 轉(zhuǎn)變成氮循環(huán)的重要原料-銨，從而調(diào)節(jié)氮代謝，并影響到光合碳代謝，進(jìn)而影響植物生長。 本試劑盒提供一種快速、精確的測定方法，土壤硝酸還原酶催化硝酸鹽還原為亞硝酸鹽； 同時抑制亞硝酸還原酶對產(chǎn)生的亞硝酸鹽的降解，亞硝酸鹽與對應(yīng)的顯色劑反應(yīng)生成（粉） 紅色偶氮化合物；該有色物質(zhì)在 540nm 有吸收峰，進(jìn)而得出土壤硝酸還原酶的活性。 二、試劑盒組分與配制： 試劑名稱 規(guī)格試劑名稱 保存要求 備注 試劑一 液體 25mL×1 瓶 4℃保存 試劑二 液體 6mL×1 瓶 4℃保存 試劑三 液體 60mL×1 瓶 4℃保存 試劑四 液體 7mL×1 瓶 4℃保存 試劑五 A 液 6mL×1 瓶 4℃保存 臨用前，可依據(jù)待檢測樣本數(shù)量， 把A液和B液等比例混合成無色的 反應(yīng) mix（注意觀察，若變粉色， 則不能使用）。 兩天之內(nèi)用完。 B 液 6mL×1 瓶 標(biāo)準(zhǔn)品 粉體 mg×1 支 4℃保存 若重新做標(biāo)曲，則用到該試劑 三、所需的儀器和用品： 酶標(biāo)儀、96 孔板、水浴鍋、臺式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、蒸餾水。 四、土壤硝酸還原酶（S-NR）的測定： 建議正式實(shí)驗前選取 2 個樣本做預(yù)測定，了解本批樣品情況，熟悉實(shí)驗流程，避免實(shí)驗 樣本和試劑浪費(fèi)！ 1、樣本制備 取新鮮土樣風(fēng)干或者 37 度烘箱風(fēng)干，先粗研磨，過 40 目篩網(wǎng)，備用。 【注】：土壤風(fēng)干，減少土壤中水分對于實(shí)驗的干擾；土壤過篩，保證取樣的均勻細(xì)膩； 2、測定步驟 ① 酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長至 540nm。 ② 在 1mLEP 管中依次加入： 試劑名稱（μL） 測定管 對照管 土樣（g） 0.25 0.25 試劑一 200 200 試劑二 50 50 蒸餾水 250 250 混勻，且務(wù)*用封口膜封 口。25℃培養(yǎng) 24h 混勻，且務(wù)*用封口膜封口。-20℃培 養(yǎng) 24h（可放在-20℃冰箱） 試劑三 500 500 混勻，12000rpm，4℃離心 10min，上清液待用本試劑盒僅供科研使用 2 ③ 顯色反應(yīng)，在 96 孔板中依次加入： 上清液 40 40 試劑四 60 60 反應(yīng) mix 100 100 混勻，25℃反應(yīng) 5min（準(zhǔn)確時間），立即于 540nm 處讀取 A 值， △A=A 測定-A 對照（每個樣本做一個自身對照管）。 【注】：若△A 值低于 0.01，可增加③ 步中上清液的體積（如由 40μL 增至 100μL，則試劑四減至 0μL， 保持總體積仍為 200μL）。 五、結(jié)果計算： 1、標(biāo)準(zhǔn)曲線方程：y =3.9669x - 0.0037；x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（μmoL/mL），y 為吸光值△A。 2、單位定義：每天每克土樣中產(chǎn)生 1μmoL 的 NO2 ˉ的量為一個酶活力單位。 S-NR(μmoL/d/g 土樣)=[(△A+0.0037)÷3.9669×V1]÷W÷T =0.252×(△A+0.0037)÷W 3、單位定義：每天每克土樣中產(chǎn)生 1μg 的 NO2 ˉ的量為一個酶活力單位。 S-NR(μg/d/g 土樣)=[(△A+0.0037)÷3.9669×V1]÷W÷T×46 =11.6×(△A+0.0037)÷W V1---反應(yīng)體系總體積，1mL； T---反應(yīng)時間，24h=1d； W---樣本實(shí)際質(zhì)量，g； 標(biāo)準(zhǔn)品的分子量---69； NO2 -的分子量---46。 附：標(biāo)準(zhǔn)曲線制作過程： 1 制備標(biāo)準(zhǔn)品母液（100μmol/mL）：把標(biāo)準(zhǔn)品*全溶解于 1mL 蒸餾水中（母液需在兩 天內(nèi)用且-20℃保存）。 2 把母液用蒸餾水稀釋成六個濃度梯度標(biāo)準(zhǔn)品：0, 0.04, 0.08, 0.12, 0.16, 0.2. μmol/mL。 也可根據(jù)實(shí)際樣本來調(diào)整標(biāo)準(zhǔn)品濃度。 3 依據(jù)顯色反應(yīng)階段的測定管的加樣順序操作，根據(jù)結(jié)果即可制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。