土壤硝酸還原酶(S-NR)試劑盒

土壤硝酸還原酶(S-NR)試劑盒

土壤硝酸還原酶(S-NR)試劑盒

本試劑盒僅供科研使用 1 土壤硝酸還原酶（Solid-Nitrate Reductase，S-NR）試劑盒說明書 (貨號：WS9030F 分光法 24 樣) 一、產品簡介： 土壤硝酸還原酶可以把土壤中的硝酸鹽轉變為亞硝酸鹽，然后再通過亞硝酸還原酶的作用 轉變成氮循環的重要原料-銨，從而調節氮代謝，并影響到光合碳代謝，進而影響植物生長。 本試劑盒提供一種快速、精確的測定方法，土壤硝酸還原酶催化硝酸鹽還原為亞硝酸鹽； 同時抑制亞硝酸還原酶對產生的亞硝酸鹽的降解，亞硝酸鹽與對應的顯色劑反應生成（粉） 紅色偶氮化合物；該物質在 540nm 有吸收峰，進而得出土壤硝酸還原酶的活性。 二、試劑盒組分與配制： 試劑名稱 規格試劑名稱 保存要求 備注 試劑一 液體 15mL×1 瓶 4℃保存 試劑二 液體 3mL×1 瓶 4℃保存 試劑三 液體 30mL×1 瓶 4℃保存 試劑四 液體 14mL×1 瓶 4℃保存 試劑五 A 液 12mL×1 瓶 4℃保存 臨用前，可依據待檢測樣本數量， 把A液和B液等比例混合成無色的 反應 mix（注意觀察，若變粉色， 則不能使用）。 兩天之內用完。 B 液 12mL×1 瓶 標準品 粉體 mg×1 支 4℃保存 若重新做標曲，則用到該試劑 三、所需的儀器和用品： 可見分光光度計、1mL 玻璃比色皿（光徑 1cm）、水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器。 四、土壤硝酸還原酶（S-NR）的測定： 建議正式實驗前選取 2 個樣本做預測定，了解本批樣品情況，熟悉實驗流程，避免實驗 樣本和試劑浪費！ 1、樣本制備 取新鮮土樣風干或者 37 度烘箱風干，先粗研磨，過 40 目篩網，備用。 【注】：土壤風干，減少土壤中水分對于實驗的干擾；土壤過篩，保證取樣的均勻細膩； 2、測定步驟 ① 可見分光光度計預熱 30min 以上，調節波長至 540nm，蒸餾水調零。 ② 在 1mLEP 管中依次加入： 試劑名稱（μL） 測定管 對照管 風干土樣（g） 0.25 0.25 試劑一 200 200 試劑二 50 50 蒸餾水 250 250 混勻，且務*用封口膜封 口。25℃培養 24h 混勻，且務*用封口膜封口。-20℃培 養 24h（可放在-20℃冰箱） 試劑三 500 500 混勻，12000rpm，4℃離心 10min，上清液待用本試劑盒僅供科研使用 2 ③ 顯色反應，在 EP 管中依次加入： 上清液 160 160 試劑四 240 240 反應 mix 400 400 混勻，25℃反應 5min（準確時間），全部液體轉移至 1mL 玻璃 比色皿（光徑 1cm）中，立即于 540nm 處讀取 A 值，△A=A 測 定-A 對照（每個樣本做一個自身對照管）。 【注】：若△A 值低于 0.01，可增加③ 步中上清液的體積（如由 160μL 增至 300μL，則試劑四減至 100μL， 保持總體積仍為 800μL）。 五、結果計算： 1、標準曲線方程：y = 6.5179x - 0.0065；x 為標準品濃度（μmoL/mL），y 為吸光值△A。 2、單位定義：每天每克土樣中產生 1μmoL 的 NO2 ˉ的量為一個 酶活力單位。 S-NR(μmoL/d/g 干土)=[(△A+0.0065)÷6.5179×V1]÷W÷T =0.153×(△A+0.0065)÷W 3、單位定義：每天每克土樣中產生 1μg NO2 ˉ的量為一個酶活力單位。 S-NR(μg/d/g 干土)=[(△A+0.0065)÷6.5179×V1]÷W÷T×46 =7.06×(△A+0.0078)÷W V1----反應體系總體積，1mL； T----反應時間，24h=1d； W----樣本實際質量，g； 標準品的分子量---69； NO2 -的分子量---46。 附：標準曲線制作過程： 1 制備標準品母液（100μmol/mL）：把標準品*全溶解于 1mL 蒸餾水中（母液需在兩 天內用且-20℃保存）。 2 把母液用蒸餾水稀釋成六個濃度梯度標準品：0, 0.04, 0.08, 0.12, 0.16, 0.2. μmol/mL。 也可根據實際樣本來調整標準品濃度。 3 依據顯色反應階段的測定管的加樣順序操作，根據結果即可制作標準曲線。