土壤葡萄糖苷酶纖維二糖酶試劑盒微板法

土壤葡萄糖苷酶纖維二糖酶試劑盒微板法

土壤葡萄糖苷酶纖維二糖酶試劑盒微板法

本試劑盒僅供科研使用 1 土壤β-葡萄糖苷酶（Solid-β-Glucosidase，S-β-GC）試劑盒說明書 （貨號：WS2130W 微板法 96 樣） 一、產(chǎn)品簡介： 土壤β-葡萄糖苷酶（β-GC，EC 3.2.1.21）能夠催化水解芳基或烴基與糖基原子團之間 的糖苷鍵生成葡萄糖，是纖維素分解酶系中重要組成成分之一，在土壤微生物的糖類代 謝方面具有重要生理功能。 土壤β-葡萄糖苷酶能夠催化對-硝基苯-β-D 吡喃葡萄糖苷生成黃色物質(zhì)對-硝基*酚 （PNP），該物質(zhì)在 405nm 有特征光吸收，進而得到土壤β-葡萄糖苷酶的活性。 二、試劑盒的組成和配制： 試劑名稱 規(guī)格 保存要求 備注 試劑一 粉劑 mg×2 瓶 -20℃保存 臨用前加入 8mL 蒸餾水，充分溶解備 用，用不完的試劑仍-20℃保存； 試劑二 液體 80mL×1 瓶 4℃保存 試劑三 液體 80mL×1 瓶 4℃保存 標準品 粉劑×1 支 4℃保存 若重新做標曲，則用到該試劑 三、所需的儀器和用品： 酶標儀、96 孔板、臺式離心機、恒溫振蕩培養(yǎng)箱/水浴鍋、可調(diào)式移液器、天平。 四、土壤β-葡萄糖苷酶（S-β-GC）酶活檢測： 建議正式實驗前選取 2 個樣本做預(yù)測定，了解本批樣品情況，熟悉實驗流程，避免實驗 樣本和試劑浪費！ 1、樣本處理： 取新鮮土樣或干土（風(fēng)干或者 37 度烘箱風(fēng)干），先粗研磨，過 40 目篩網(wǎng)備用。 【注】：土壤風(fēng)干，減少土壤中水分對于實驗的干擾；土壤過篩，保證取樣的均勻細膩； 2、上機檢測： ① 酶標儀預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長至 405nm。 ② 在 EP 管中依次加入： 試劑名稱（μL） 測定管 對照管 空白管（僅做一次） 土樣（g） 0.05 0.05 試劑一 150 150 蒸餾水 150 試劑二 300 300 300 混勻， 37℃振蕩反應(yīng) 1h 試劑三 350 350 350 混勻，12000rpm 室溫離心 10min，取上清液 200μL 于 96 孔板中， 于 405nm 下讀取吸光值 A，△A=A 測定- A 對照-A 空白（每個樣本 做一個自身對照）。 【注】：1.若ΔA 在零附近徘徊，可延長 37℃的孵育時間 T（如增至 4 小時或更長），或增加土樣質(zhì) 量 W（如增至 0.2g）。則改變后的 T 和 W 需代入計算公式重新計算。 2.若測定管 A 值大于 1.5 或△A 大于 1.5，可縮短 37℃的孵育時間 T（如減至 0.5 小時或更短）。 則改變后 T 需代入計算公式重新計算。或?qū)ψ詈笠徊降拇龣z測上清液（包括測定管、對照管 和空白管）同時用蒸餾水進行稀釋，稀釋倍數(shù) D 代入計算公式。本試劑盒僅供科研使用 2 五、結(jié)果計算： 1、標準曲線方程為 y = 0.0965x + 0.005；x 為標準品質(zhì)量（μg），y 為△A。 2、單位定義：每小時每克土樣中產(chǎn)生 1nmol 對-硝基*酚（PNP）定義為一個酶活單位。 S-β-GC 活力(nmol/h/g 土樣)=(ΔA-0.005) ÷0.0965÷Mr×103÷W÷T×D =74.5×(ΔA-0.005)÷W×D T---反應(yīng)時間，1h； W---實際稱取土樣質(zhì)量，g； Mr--- PNP 相對分子質(zhì)量，139.11； D---稀釋倍數(shù)，未稀釋即為 1。 附：標準曲線制作過程： 1 制備標準品母液（1mg/mL）：向標準品 EP 管里面加入 1mL 蒸餾水。 2 把母液稀釋成以下濃度梯度的標準品：0, 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5 mg/mL。也可根據(jù)實際 樣本來調(diào)整標準品濃度。 3 在 EP 管中依次加入：20μL 標準品+130μL 蒸餾水+300μL 試劑二+350μL 試劑三，混 勻，取 200μL 至 96 孔板中，于 405nm 下讀取吸光值。 4 根據(jù)結(jié)果制作標準曲線。