土壤葡萄糖苷酶(S-β-GC)纖維二糖酶試劑盒

土壤葡萄糖苷酶(S-β-GC)纖維二糖酶試劑盒

土壤葡萄糖苷酶(S-β-GC)纖維二糖酶試劑盒

本試劑盒僅供科研使用 1 土壤β-葡萄糖苷酶（Solid-β-Glucosidase，S-β-GC）試劑盒說明書 （貨號(hào)：WS2130F 分光法 48 樣） 一、產(chǎn)品簡介： 土壤β-葡萄糖苷酶（β-GC，EC 3.2.1.21）能夠催化水解芳基或烴基與糖基原子團(tuán)之間 的糖苷鍵生成葡萄糖，是纖維素分解酶系中重要組成成分之一，在土壤微生物的糖類代 謝方面具有重要生理功能。 土壤β-葡萄糖苷酶能夠催化對(duì)-硝基苯-β-D 吡喃葡萄糖苷生成黃色物質(zhì)對(duì)-硝基*酚 （PNP），該物質(zhì)在 405nm 有特征光吸收，進(jìn)而得到土壤β-葡萄糖苷酶的活性。 二、試劑盒的組成和配制： 試劑名稱 規(guī)格 保存要求 備注 試劑一 粉劑 mg×1 瓶 -20℃保存 臨用前加入 9mL 蒸餾水，充分溶解 備用，用不完的試劑仍-20℃保存； 試劑二 液體 40mL×1 瓶 4℃保存 試劑三 液體 40mL×1 瓶 4℃保存 標(biāo)準(zhǔn)品 粉劑×1 支 4℃保存 若重新做標(biāo)曲，則用到該試劑 三、所需的儀器和用品： 可見分光光度計(jì)、1mL 玻璃比色皿(光徑 1cm)、臺(tái)式離心機(jī)、恒溫振蕩培養(yǎng)箱/水浴鍋、 可調(diào)式移液器、天平。 四、土壤β-葡萄糖苷酶（S-β-GC）酶活檢測： 建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測定，了解本批樣品情況，熟悉實(shí)驗(yàn)流程，避免實(shí) 驗(yàn)樣本和試劑浪費(fèi)！ 1、樣本處理: 取新鮮土樣或干土（風(fēng)干或者 37 度烘箱風(fēng)干），先粗研磨，過 40 目篩網(wǎng)備用。 【注】：土壤風(fēng)干，減少土壤中水分對(duì)于實(shí)驗(yàn)的干擾；土壤過篩，保證取樣的均勻細(xì)膩； 2、測定步驟: ① 可見分光光度計(jì)預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長至 405nm，蒸餾水調(diào)零。 ② 在 EP 管中依次加入： 試劑名稱（μL） 測定管 對(duì)照管 空白管（僅做一次） 土樣（g） 0.05 0.05 試劑一 150 150 蒸餾水 150 試劑二 300 300 300 混勻， 37℃振蕩反應(yīng) 1h 試劑三 350 350 350 混勻，12000rpm 室溫離心 10min，取全部上清液轉(zhuǎn)移至 1mL 玻璃比 色皿（光徑 1cm）中，405nm 下讀取吸光值 A，△A=A 測定- A 對(duì)照-A 空白（每個(gè)樣本做一個(gè)自身對(duì)照）。 【注】：1.若ΔA 在零附近徘徊，可延長 37℃的孵育時(shí)間 T（如增至 4 小時(shí)或更長），或增加土樣質(zhì) 量 W（如增至 0.2g）。則改變后的 T 和 W 需代入計(jì)算公式重新計(jì)算。 2.若測定管 A 值大于 1.5 或△A 大于 1.5，可縮短 37℃的孵育時(shí)間 T（如減至 0.5 小時(shí)或更短）。 則改變后 T 需代入計(jì)算公式重新計(jì)算。或?qū)ψ詈笠徊降拇龣z測上清液（包括測定管、對(duì)照管 和空白管）同時(shí)用蒸餾水進(jìn)行稀釋，稀釋倍數(shù) D 代入計(jì)算公式。本試劑盒僅供科研使用 2 五、結(jié)果計(jì)算： 1、標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為 y = 0.1461x + 0.0087；x 為標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)量（μg），y 為△A。 2、單位定義：每小時(shí)每克土樣中產(chǎn)生 1nmol 對(duì)-硝基*酚（PNP）定義為一個(gè)酶活單位。 S-β-GC 活力(nmol/h/g 土樣)=(ΔA-0.0087) ÷0.1461÷Mr×103÷W÷T×D =49.2×(ΔA-0.0087)÷W×D T---反應(yīng)時(shí)間，1h； W---實(shí)際稱取土樣質(zhì)量，g； Mr--- PNP 相對(duì)分子質(zhì)量，139.11； D---稀釋倍數(shù)，未稀釋即為 1。 附：標(biāo)準(zhǔn)曲線制作過程： 1 制備標(biāo)準(zhǔn)品母液（1mg/mL）：向標(biāo)準(zhǔn)品 EP 管里面加入 1mL 蒸餾水。 2 把母液稀釋成以下濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)品：0, 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5 mg/mL。也可根據(jù)實(shí)際 樣本來調(diào)整標(biāo)準(zhǔn)品濃度。 3 在 EP 管依次加入：20μL 標(biāo)準(zhǔn)品+130μL 蒸餾水+300μL 試劑二+350μL 試劑三，混勻， 全部上清液轉(zhuǎn)移至 1mL 玻璃比色皿（光徑 1cm）中，于 405nm 下讀取吸光值。 4 根據(jù)結(jié)果制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。