土壤多酚氧化酶(S-PPO)試劑盒,微板法

土壤多酚氧化酶(S-PPO)試劑盒,微板法

土壤多酚氧化酶(S-PPO)試劑盒,微板法

本試劑盒僅供科研使用 1 土壤多酚氧化酶（Solid-Polyphenol oxidase，S-PPO）試劑盒說明書 (貨號：WS1130W 微板法 96 樣) 一、產品簡介： 土壤多酚氧化酶(Polyphenoloxidase，簡稱 PPO)是一類以銅、錳為活性中心的氧化還原 酶，主要來源于土壤微生物、植物根系分泌物及動植物殘體分解釋放的酶，能把土壤中芳 香族化合物氧化成醌，醌與土壤中蛋白質、氨基酸、糖類、礦物等物質反應生成大小分子 量不等有機質和色素，完成土壤芳香族化合物循環，也可用于土壤環境修復。 土壤多酚氧化酶能夠催化底物*旋多巴產生紅色的醌類物質，依據文獻選擇該有色產物 在 475nm 做為特征光吸收波長，通過測定進而計算得出土壤多酚氧化酶活性大小。 二、試劑盒組分與配制： 試劑名稱 規格 保存要求 備注 試劑一 液體 110mL×2 瓶 4℃保存 試劑二 粉體 mg×3 瓶 4℃保存 臨用前甩幾下使粉劑落入底部，每瓶 加入 30mL 試劑一，超聲溶解，溶解 后的試劑三天內用完。 三、所需的儀器和用品： 酶標儀、96 孔板、低溫離心機、水浴鍋/恒溫振蕩培養箱、可調式移液器。 四、土壤多酚氧化酶（S-PPO）的測定： 建議正式實驗前選取 2 個樣本做預測定，了解本批樣品情況，熟悉實驗流程，避免實驗 樣本和試劑浪費！ 1、樣本制備： 取新鮮土樣或風干土壤，先粗研磨，過 40 目篩網，待測備用。 2、上機檢測： ① 酶標儀預熱 30min 以上，調節波長至 475nm。 ② 在 EP 管中依次加入： 試劑名稱（μL） 測定管 對照管 土樣（g） 0.1 0.1 試劑一 200 1000 試劑二 800 振蕩混勻，25℃水浴（間隔 10min 振蕩混勻幾下）或恒溫振蕩培養 箱振蕩孵育 1 h 孵育結束后立即于 4℃（需低溫）12000rpm 離心 5min，取 200μL 上清液于 96 孔板中，于 475nm 處讀取吸光值 A，△A=A 測定管-A 對照管（每個樣本需做一個自身對照）。 【注】：1. 若 A 測定大于 1.8，可用蒸餾水對離心后待檢測的上清液進行稀釋，則稀釋倍數 D 需代入公 式重新計算。 2. 若△A 值小于 0.01，可延長 25℃的孵育時間 T（如由 1h 可增加至 4h），則改變后的 T 需代入 公式重新計算。 五、結果計算： 1、單位定義：每小時每克土壤中產生 1nmol 紅色產物定義為一個酶活力單位。本試劑盒僅供科研使用 2 S-PPO 活力(nmol/h/g 土樣)=[ΔA÷(ε×d)×V1×109]÷W÷T×D=540.5×△A÷W×D ε---紅色產物摩爾吸光系數，3.7×103 L/mol/cm； T---反應時間，1h； V1---反應總體積，1000μL=1mL=1×10-3 L； d---光徑，0.5cm； D---稀釋倍數，未稀釋即為 1； W---土壤樣本實際取樣量，g。