土壤多酚氧化酶(S-PPO)試劑盒

土壤多酚氧化酶(S-PPO)試劑盒

土壤多酚氧化酶(S-PPO)試劑盒

本試劑盒僅供科研使用 1 土壤多酚氧化酶（Solid-Polyphenol oxidase，S-PPO）試劑盒說明書 (貨號：WS1130F 分光法 48 樣) 一、產(chǎn)品簡介： 土壤多酚氧化酶(Polyphenoloxidase，簡稱 PPO)是一類以銅、錳為活性中心的氧化還原 酶，主要來源于土壤微生物、植物根系分泌物及動(dòng)植物殘?bào)w分解釋放的酶，能把土壤中芳 香族化合物氧化成醌，醌與土壤中蛋白質(zhì)、氨基酸、糖類、礦物等物質(zhì)反應(yīng)生成大小分子 量不等有機(jī)質(zhì)和色素，完成土壤芳香族化合物循環(huán)，也可用于土壤環(huán)境修復(fù)。 土壤多酚氧化酶能夠催化底物左*多巴產(chǎn)生紅色的醌類物質(zhì)，依據(jù)文獻(xiàn)選擇該有色產(chǎn)物 在 475nm 做為特征光吸收波長，通過測定進(jìn)而計(jì)算得出土壤多酚氧化酶活性大小。 二、試劑盒組分與配制： 試劑名稱 規(guī)格 保存要求 備注 試劑一 液體 110mL×1 瓶 4℃保存 試劑二 粉體 mg×2 瓶 4℃保存 臨用前甩幾下使粉劑落入底部，每瓶 加入 25mL 試劑一，超聲溶解，溶解 后的試劑三天內(nèi)用完。 三、所需的儀器和用品： 可見分光光度計(jì)、1mL 玻璃比色皿（光徑 1cm）、低溫離心機(jī)、水浴鍋/恒溫振蕩培養(yǎng) 箱、可調(diào)式移液器。 四、土壤多酚氧化酶（S-PPO）的測定： 建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測定，了解本批樣品情況，熟悉實(shí)驗(yàn)流程，避免實(shí)驗(yàn) 樣本和試劑浪費(fèi)！ 1、樣本制備： 取新鮮土樣或風(fēng)干土壤，先粗研磨，過 40 目篩網(wǎng)，待測備用。 2、上機(jī)檢測： ① 可見分光光度計(jì)預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長至 475nm，蒸餾水調(diào)零。 ② 在 EP 管中依次加入： 試劑名稱（μL） 測定管 對照管 土樣（g） 0.1 0.1 試劑一 200 1000 試劑二 800 振蕩混勻，25℃水浴（間隔 10min 振蕩混勻幾下）或者恒溫振蕩培 養(yǎng)箱振蕩孵育 1 h 孵育結(jié)束后立即于 4℃（需低溫）12000rpm 離心 5min，取 700μL 上清液至 1mL 玻璃比色皿（光徑 1cm）中，于 475nm 處讀取吸光 值 A，△A=A 測定管-A 對照管（每個(gè)樣本需做一個(gè)自身對照）。 【注】：1. 若 A 測定大于 1.8，可用蒸餾水對離心后待檢測的上清液進(jìn)行稀釋，則稀釋倍數(shù) D 需代入公 式重新計(jì)算。 2. 若△A 值小于 0.01，可延長 25℃的孵育時(shí)間 T（如由 1h 可增加至 4h），則改變后的 T 需代入 公式重新計(jì)算。本試劑盒僅供科研使用 2 五、結(jié)果計(jì)算： 1、單位定義：每小時(shí)每克土壤中產(chǎn)生 1nmol 紅色產(chǎn)物定義為一個(gè)酶活力單位。 S-PPO 活力(nmol/h/g 土樣)=[ΔA÷(ε×d)×V1×109]÷W÷T×D=270.3×△A÷W×D ε---紅色產(chǎn)物摩爾吸光系數(shù)，3.7×103 L/mol/cm； T---反應(yīng)時(shí)間，1h； V1---反應(yīng)總體積，1000μL=1mL=1×10-3 L； d---光徑，1cm； D---稀釋倍數(shù)，未稀釋即為 1； W---土壤樣本實(shí)際取樣量，g。