土壤過(guò)氧化物酶(S-POD)試劑盒

土壤過(guò)氧化物酶(S-POD)試劑盒

土壤過(guò)氧化物酶(S-POD)試劑盒

本試劑盒僅供科研使用 1 土壤過(guò)氧化物酶（Solid- Peroxidase，S-POD）試劑盒說(shuō)明書(shū) （貨號(hào)：WS7130FF 分光法 48 樣） 一、產(chǎn)品簡(jiǎn)介： 土壤過(guò)氧化物酶（S-POD）主要來(lái)源于土壤微生物，能夠氧化土壤有機(jī)物質(zhì)產(chǎn)生過(guò)氧 化物，在腐殖質(zhì)的形成過(guò)程中具有重要作用。 土壤過(guò)氧化物酶（S-POD）在過(guò)氧化氫存在下催化底物左*多巴產(chǎn)生紅色的醌類(lèi)物質(zhì)， 依據(jù)文獻(xiàn)選擇該有色產(chǎn)物在 475nm 做為特征光吸收波長(zhǎng)，通過(guò)測(cè)定進(jìn)而計(jì)算得出土壤過(guò) 氧化物酶活性大小。 二、試劑盒組分與配制： 試劑名稱(chēng) 規(guī)格 保存要求 備注 試劑一 液體 110mL×1 瓶 4℃保存 試劑二 粉體 mg×2 瓶 4℃保存 臨用前甩幾下使粉劑落入底部，每瓶 加入 25mL 試劑一，超聲溶解，溶解 后的試劑三天內(nèi)用完。 試劑三 液體μL×1 支 4℃保存 臨用前甩幾下使液體落入底部，取出 60μL 至新 EP 管中并再加 1.5mL 的蒸 餾水，混勻備用，三天內(nèi)用完。 三、所需的儀器和用品： 可見(jiàn)分光光度計(jì)、1mL 玻璃比色皿（光徑 1cm）、低溫離心機(jī)、水浴鍋/恒溫振蕩培養(yǎng) 箱、可調(diào)式移液器。 四、土壤過(guò)氧化物酶（S-POD）的測(cè)定： 建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測(cè)定，了解本批樣品情況，熟悉實(shí)驗(yàn)流程，避免實(shí)驗(yàn) 樣本和試劑浪費(fèi)！ 1、樣本制備： 取新鮮土樣或風(fēng)干土壤，先粗研磨，過(guò) 40 目篩網(wǎng)，待測(cè)備用。 2、上機(jī)檢測(cè)： ① 可見(jiàn)分光光度計(jì)預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 475nm，蒸餾水調(diào)零。 ② 在 EP 管中依次加入： 試劑名稱(chēng)（μL） 測(cè)定管 對(duì)照管 土樣（g） 0.1 0.1 試劑一 160 960 試劑二 800 試劑三 40 40 振蕩混勻，25℃水浴（間隔 10min 振蕩混勻幾下）或者恒溫振蕩培 養(yǎng)箱振蕩孵育 1 h 孵育結(jié)束后立即于 4℃（需低溫）12000rpm 離心 5min，取 700μL 上清液至 1mL 玻璃比色皿（光徑 1cm）中，于 475nm 處讀取吸光 值 A，△A=A 測(cè)定管-A 對(duì)照管（每個(gè)樣本需做一個(gè)自身對(duì)照）。 【注】：1. 若 A 測(cè)定大于 1.8，可用蒸餾水對(duì)離心后待檢測(cè)的上清液進(jìn)行稀釋?zhuān)瑒t稀釋倍數(shù) D 需代入公 式重新計(jì)算。本試劑盒僅供科研使用 2 2. 若△A 值小于 0.01，可延長(zhǎng) 25℃的孵育時(shí)間 T（如由 1h 可增加至 4h），則改變后的 T 需代入 公式重新計(jì)算。 五、結(jié)果計(jì)算： 1、單位定義：每小時(shí)每克土壤中產(chǎn)生 1nmol 紅色產(chǎn)物定義為一個(gè)酶活力單位。 S-POD 活力(nmol/h/g 土樣)=[ΔA÷(ε×d)×V1×109]÷W÷T×D=270.3×△A÷W×D ε---紅色產(chǎn)物摩爾吸光系數(shù)，3.7×103 L/mol/cm； T---反應(yīng)時(shí)間，1h； V1----反應(yīng)總體積，1000μL=1mL=1×10-3 L； d---光徑，1cm； D---稀釋倍數(shù)，未稀釋即為 1； W---土壤樣本實(shí)際取樣量，g。