植物銨態氮試劑盒,微板法

植物銨態氮試劑盒,微板法

植物銨態氮試劑盒,微板法

本試劑盒僅供科研使用 1 植物銨態氮含量試劑盒說明書 （貨號：WS0140W 微板法 96 樣） 一、產品簡介： 氮素是構成生物體的一種必需元素，自然界中的氮素循環包括許多轉化作用。空氣中的氮 氣被固氮微生物及植物與微生物的共生體固定成氨態氮，經過硝化微生物的作用轉化成硝態 氮，后者被植物或微生物同化成有機氮化物，植物組織氨氮含量可反映植物受脅迫的程度。 α-氨基酸與水合茚三酮溶液一起加熱，經氧化脫氨變成相應的α-酮酸，酮酸進一步脫羧變 成醛，水合茚三酮則被還原，在弱酸環境中，還原型茚三酮，氨和另一分子水合茚三酮反應， 縮合生成藍紫色物質，在 570nm 處有特征吸收峰。 二、測試盒組成和配制： [注]：粉劑量在 mg 級別，使用前用手甩幾次或者進行離心，打開直接加入要求的試劑即可。 三、所需的儀器和用品： 酶標儀、96 孔板、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液槍、研缽、無水乙醇、冰和蒸餾水。 四、植物銨態氮含量的測定： 建議正式實驗前選取 2 個樣本做預測定，了解本批樣品情況，熟悉實驗流程，避免實驗 樣本和試劑浪費！ 1、樣本制備： ① 組織樣本： 稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液，進行室溫勻漿，12000rpm，4℃離心 10min，上 清液置冰上待測。 [注]:也可按照組織質量（g）提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例進行提取。 ② 細菌/細胞樣本： 先收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；取 500 萬細菌或細胞加入 1mL 提取液； 超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，300W，超聲 3s，間隔 7s，總時間 3min）；12000rpm，4℃ 離心 10min，取上清，置冰上待測。 [注]:若增加樣本量，按照細菌/細胞數量（104個）：提取液體積（mL）為 500~1000：1 的比例進行提取。 ③ 液體樣本：直接檢測；若渾濁，離心后取上清檢測。 2、上機檢測： ① 酶標儀預熱 30 min，調節波長到 570 nm。 ② 在 EP 管中按照下表依次加入試劑： 試劑名稱 規格 保存要求 備注 提取液 液體 110mL×1 瓶 4℃保存 試劑一 液體 60mL×1 瓶 4℃保存 試劑二 粉劑×4 瓶 4℃保存 臨用前加入 1.5mL 無水乙醇，蓋緊后充分 混勻，再加入 13.5mL 試劑一混勻,10 天內 用完。 試劑三 粉劑×3 支 4℃保存 用前甩幾下或 4℃離心使試劑落入試管底 部，每支再加 1.5 mL 蒸餾水充分溶解，用 不完的試劑分裝后-20℃保存(可保存一個 月)，禁止反復凍融，解凍后可 4℃保存并 一周內使用完。 標準品 液體×1 支 4℃保存 若重新做標曲，則用到該試劑。本試劑盒僅供科研使用 2 試劑名稱（μL） 測定管 空白管（只做一次） 蒸餾水 40 上清液 40 試劑二 560 560 試劑三 40 40 混勻，蓋緊蓋（可用封口膜纏繞，防止水分散失）， 置于沸水浴中 15 min，再冷水迅速冷卻， 95%乙醇 320 320 混勻，取 200μL 澄清液體（若渾濁可 8000rpm 室溫離心 5min）于 96 孔板中，在 570nm 讀取吸光值 A，△A=A 測定- A 空白。 五、結果計算： 1、標準曲線方程：y = 0.3963x + 0.006；x 是標準品摩爾濃度(μmol/mL)，y 是ΔA。 2、按樣本質量計算： 銨態氮含量(μmol/g 鮮重)=[(ΔA-0.006)÷0.3963×V1] ÷(V1÷V×W) =2.52×(ΔA-0.006)÷W 3、按細胞數量計算： 銨態氮含量(μmol/104 cell)=[(ΔA-0.006) ÷0.3963×V1] ÷(V1÷V×500) =2.52×(ΔA-0.006)÷500 4、按照液體體積計算： 銨態氮含量(μmol/mL)=[(ΔA-0.006) ÷0.3963×V1]÷V1=2.52×(ΔA-0.006) V---樣品提取液總體積，1mL； V1---加入樣本體積，0.04 mL； 500---細胞數量，百萬； W---樣品質量，g。 附：標準曲線制作過程： 1 標準品母液（10μmol/mL）； 2 把母液用蒸餾水稀釋成以下濃度梯度的標準品：0, 0.4, 0.8, 1.2, 1.6, 2.μmol/mL。也可 根據實際樣本來調整標準品濃度。 3 依據測定管的加樣表操作，根據結果即可制作標準曲線。