植物銨態(tài)氮試劑盒

植物銨態(tài)氮試劑盒

植物銨態(tài)氮試劑盒

本試劑盒僅供科研使用 1 植物銨態(tài)氮含量試劑盒說(shuō)明書 （貨號(hào)：WS0140F 分光法 48 樣） 一、產(chǎn)品簡(jiǎn)介： 氮素是構(gòu)成生物體的一種必需元素，自然界中的氮素循環(huán)包括許多轉(zhuǎn)化作用。空氣中的氮 氣被固氮微生物及植物與微生物的共生體固定成氨態(tài)氮，經(jīng)過硝化微生物的作用轉(zhuǎn)化成硝態(tài) 氮，后者被植物或微生物同化成有機(jī)氮化物，植物組織氨氮含量可反映植物受脅迫的程度。 α-氨基酸與水合茚三酮溶液一起加熱，經(jīng)氧化脫氨變成相應(yīng)的α-酮酸，酮酸進(jìn)一步脫羧 變成醛，水合茚三酮?jiǎng)t被還原，在弱酸環(huán)境中，還原型茚三酮，氨和另一分子水合茚三酮 反應(yīng)， 縮合生成藍(lán)紫色物質(zhì)，在 570nm 處有特征吸收峰。 二、測(cè)試盒組成和配制： [注]：粉劑量在 mg 級(jí)別，使用前用手甩幾次或者進(jìn)行離心，打開直接加入要求的試劑即可。 三、所需的儀器和用品： 可見分光光度計(jì)、1mL 玻璃比色皿（光徑 1cm）、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液槍、 研缽、無(wú)水乙醇、冰。 四、植物銨態(tài)氮含量的測(cè)定： 建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測(cè)定，了解本批樣品情況，熟悉實(shí)驗(yàn)流程，避免實(shí)驗(yàn) 樣本和試劑浪費(fèi)！ 1、樣本制備： ① 組織樣本： 稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液，進(jìn)行室溫勻漿，12000rpm，4℃離心 10min，上 清液置冰上待測(cè)。 [注]:也可按照組織質(zhì)量（g）提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例進(jìn)行提取。 ② 細(xì)菌/細(xì)胞樣本： 先收集細(xì)菌/細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；取 500 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液； 超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次）， 12000rpm，4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。 [注]:若增加樣本量，可按照細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（mL）為 500~1000：1 的比例提取。 ③ 液體樣本：直接檢測(cè)；若渾濁，離心后取上清檢測(cè)。 2、上機(jī)檢測(cè)： ① 可見分光光度計(jì)預(yù)熱 30 min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到 570 nm，蒸餾水調(diào)零。 ② 在 EP 管中按照下表依次加入試劑： 試劑名稱 規(guī)格 保存要求 備注 提取液 液體 60mL×1 瓶 4℃保存 試劑一 液體 30mL×1 瓶 4℃保存 試劑二 粉劑×2 瓶 4℃保存 臨用前每瓶加入 1.5mL 無(wú)水乙醇，蓋緊后 充分混勻，再加入 13.5mL 試劑一混勻,10 天內(nèi)用完。 試劑三 粉劑×2 支 4℃保存 用前甩幾下或 4℃離心使試劑落入試管底 部，每支再加 1.5 mL 蒸餾水充分溶解，用 不完的試劑分裝后-20℃保存(可保存一個(gè) 月)，禁止反復(fù)凍融，解凍后可 4℃保存并 一周內(nèi)使用完。 標(biāo)準(zhǔn)品 液體×1 支 4℃保存 若重新做標(biāo)曲，則用到該試劑。本試劑盒僅供科研使用 2 試劑名稱（μL） 測(cè)定管 空白管（只做一次） 蒸餾水 40 上清液 40 試劑二 560 560 試劑三 40 40 混勻，蓋緊蓋（可用封口膜纏繞，防止水分散失）， 置于沸水浴中 15 min，再冷水迅速冷卻， 95%乙醇 320 320 混勻，全部澄清液體（若渾濁可 8000rpm 室溫離心 5min） 轉(zhuǎn)移至 1mL 玻璃比色皿（光徑 1cm）中，在 570nm 讀取 吸光值 A，△A=A 測(cè)定- A 空白。 五、結(jié)果計(jì)算： 1、標(biāo)準(zhǔn)曲線方程：y = 0.4763x + 0.0154；x 是標(biāo)準(zhǔn)品摩爾濃度（μmo/mL），y 是ΔA。 2、按樣本質(zhì)量計(jì)算： 銨態(tài)氮含量(μmol/g 鮮重)=[(ΔA-0.0154)÷0.4763×V1] ÷(V1÷V×W) =2.1×(ΔA-0.0154)÷W 3、按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算： 銨態(tài)氮含量(μmol/104 cell)=[(ΔA-0.0154)÷0.4763×V1] ÷(V1÷V×500) =2.1×(ΔA-0.0154)÷500 4、按照液體體積計(jì)算： 銨態(tài)氮含量(μmol/mL)=[(ΔA-0.0154)÷0.4763×V1]÷V1=2.1×(ΔA-0.0154) V---樣品提取液總體積，1mL； V1---加入樣本體積，0.04 mL； 500---細(xì)胞數(shù)量，百萬(wàn)； W---樣品質(zhì)量，g。 附：標(biāo)準(zhǔn)曲線制作過程： 1 標(biāo)準(zhǔn)品母液（10μmol/mL）； 2 把母液用蒸餾水稀釋成以下濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)品：0, 0.4, 0.8, 1.2, 1.6, 2.μmol/mL。也可 根據(jù)實(shí)際樣本來(lái)調(diào)整標(biāo)準(zhǔn)品濃度。 3 依據(jù)測(cè)定管的加樣表操作，根據(jù)結(jié)果即可制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。