天冬酰胺（Asn)含量試劑盒,微板法

天冬酰胺（Asn)含量試劑盒,微板法

天冬酰胺（Asn)含量試劑盒,微板法

一、產(chǎn)品簡(jiǎn)介：
冬酰胺（Asn）是20種天然氨基酸之一，被所有生物用于蛋白質(zhì)合成。在人類中是一種非必需氨基酸，因?yàn)樗梢栽隗w內(nèi)由天冬氨酸和谷氨*胺合成。
本試劑盒利用天冬酰胺酶使天冬酰胺分解成天冬氨酸和NH4+，接著在谷*酸脫氫酶作用下使NH4+和α-酮戊二酸反應(yīng)，同時(shí)使NADH氧化，通過(guò)檢測(cè)NADH在特異吸收波長(zhǎng)340nm處的下降量，進(jìn)而計(jì)算出天冬酰胺（Asn）的含量。

二、所需的儀器和用品：
紫外分光光度計(jì)、1mL石英比色皿（光徑1cm）、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、研缽、冰、蒸餾水。

三、所需的儀器和用品： 酶標(biāo)儀、96 孔 UV 板（用于紫外光波長(zhǎng)下的測(cè)定）、蒸餾水、常溫離心機(jī)，可調(diào)式往返 振蕩機(jī)。 四、蔬菜中硝酸鹽含量測(cè)定： 建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測(cè)定，了解樣本自身情況，熟悉實(shí)驗(yàn)流程，避免實(shí)驗(yàn) 樣本和試劑浪費(fèi)！ 1、樣本處理： ① 組織樣本：取 0.2g 組織樣本（若樣本較大可研磨粉碎后取樣），加 1mL 的蒸餾水 研磨勻漿，全部轉(zhuǎn)移至 2mLEP 管中，再依次加入 0.06mL 試劑一和 10mg 的活性炭 混勻，放置于可調(diào)式往返振蕩機(jī)上（200 次/min）振蕩 30min(如無(wú)此儀器需間隔 3min 手動(dòng)晃動(dòng)幾秒)。再依次加入 0.02mL 的試劑二和 0.02mL 的試劑三，充分混勻，加 0.9mL 蒸餾水定容至 2mL，混勻后室溫放置 5min。12000rpm 室溫離心 5min，澄清 的上清液做為樣本待檢上清液；空白待檢上清液制備過(guò)程除了不加樣本之外，其他 操作步驟同組織樣本制備過(guò)程。 2、上機(jī)檢測(cè)： 1 酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上。 2 在 96 孔 UV 板中依次加入： 試劑名稱（μL) 測(cè)定管 空白管（僅做一次） 樣本待檢測(cè)上清液 200 空白待檢測(cè)上清液 200 混勻， 于 219nm 分別讀吸光值 A，△A=A 測(cè)定管-A 空白管。 【注】 若 A 值超過(guò) 1.2，可用蒸餾水對(duì)待檢上清液稀釋，稀釋倍數(shù) D 代入計(jì)算公式重新計(jì)算； 五、結(jié)果計(jì)算： 1、標(biāo)準(zhǔn)曲線方程：y = 0.0348x + 0.0029；x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（μg/mL），y 為吸光值△A。