尿素含量測定試劑盒(二乙酰一肟法)

尿素含量測定試劑盒(二乙酰一肟法)

尿素含量測定試劑盒(二乙酰一肟法)

本試劑盒僅供科研使用 1 尿素含量（二乙酰一肟法）檢測試劑盒說明書 （貨號：WS1440F 分光法 48 樣） 一、產品簡介： 在加熱和強酸條件下，尿素與二乙酰一肟及安*比林反應呈黃色，在波長460 nm 處有特征吸收峰。通過檢測 生成的黃色物質在460nm處的增加量進而得出樣本中尿素含量。 二、試劑盒組分與配制： 試劑名稱 規格 保存要求 備注 試劑一 液體2.5mL×1瓶 4℃保存 試劑二 粉體 mg×1 瓶 4℃保存 臨用前甩幾下使粉體落入底部，先加 2.8mL 蒸餾水溶解，再緩慢加 2.8mL 磷酸混勻，最 后再加 5.6mL 硫酸混勻，冷卻至室溫備用。 標準管 粉體 mg×2 支 4℃保存 臨用前每支加1mL蒸餾水溶解（4mg/mL），再 用蒸餾水稀釋40倍（1:39）成0.1mg/mL。 三、所需儀器和用品： 可見分光光度計、1mL 玻璃比色皿（光徑 1cm）、天平、移液器、離心機、蒸餾水。 四、尿素含量檢測： 建議正式實驗前選取 2 個樣本做預測定，了解本批樣品情況，熟悉實驗流程，避免實驗樣本和試劑浪費！ 1、樣本制備： 0.1g 組織樣本，加 1mL 的蒸餾水研磨，超聲萃取 10min 后定容至 1mL，室溫靜置 30min，12000rpm，常溫 離心 10min，上清液待測。 2、上機檢測： 1 可見分光光度計預熱 30min，設置溫度在 37℃，設定波長到 460nm。 2 做實驗前選取 2 個樣本，找出適合本次檢測樣本的稀釋倍數 D。 3 所有試劑解凍至室溫，在 EP 管依次加入： 試劑名稱（μL） 測定管 對照管 空白管 （僅做一次） 標準管 （僅做一次） 樣本 100 100 蒸餾水 50 100 標準品 100 試劑一 50 50 50 試劑二 100 100 100 100 混勻，95℃沸水浴反應 20min 蒸餾水 500 500 500 500 混勻，（若渾濁則 5000rpm 室溫離心 5min 后取上清液測定）取 700μL 至 1mL 玻璃比色皿（光徑 1cm）中，于 460nm 處讀吸光值 A，△A=A 測定-A 對照。 【注】：測定管的 A 值若超過 1.5，可把樣本再進行稀釋，稀釋倍數 D 代入計算公式。 五、結果計算： 1、按照組織質量計算： 尿素含量(mg/g)=(C 標準×V1)×△A÷(A 標準-A 空白)÷(V1÷V×W)×D=0.1×△A÷(A 標準-A 空白)÷W×D 尿素含量(mg/kg)=(C 標準×V1)×103×△A÷(A 標準-A 空白)÷(V1÷V×W)×D=100×△A÷(A 標準-A 空白)÷W×D C 標準---尿素標品濃度，0.1mg/mL； D---稀釋倍數，未稀釋即為 1； 60.04---尿素分子量； W---取樣質量，g； V---提取液體積，1mL； V1---加入樣本體積，0.1mL。