尿素含量測(cè)定試劑盒(二乙酰一肟法),微板法

尿素含量測(cè)定試劑盒(二乙酰一肟法),微板法

尿素含量測(cè)定試劑盒(二乙酰一肟法),微板法

本試劑盒僅供科研使用 1 尿素含量（二乙酰一肟法）檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū) （貨號(hào)：WS1440W 微板法 96 樣） 一、產(chǎn)品簡(jiǎn)介： 在加熱和強(qiáng)酸條件下，尿素與二乙酰一肟及安*比林反應(yīng)呈黃色，在波長(zhǎng)460 nm 處有特征吸收峰。通過(guò)檢測(cè) 生成的黃色物質(zhì)在460nm處的增加量進(jìn)而得出樣本中尿素含量。 二、試劑盒組分與配制： 試劑名稱 規(guī)格 保存要求 備注 試劑一 液體 2mL×1 瓶 4℃保存 試劑二 粉體 mg×1 瓶 4℃保存 臨用前甩幾下使粉體落入底部，先加 2.4mL 蒸餾水溶解，再緩慢加 2.4mL 磷酸混勻，最后再加 4.8mL 硫酸混勻， 冷卻至室溫備用。 標(biāo)準(zhǔn)管 粉體 mg×2 支 4℃保存 臨 用 前 每 支 加 1mL 蒸 餾 水 溶 解 （4mg/mL）， 再用蒸餾水稀釋 40 倍 （1:39）成 0.1mg/mL。 三、所需儀器和用品： 酶標(biāo)儀、96 孔板、天平、移液器、離心機(jī)、蒸餾水。 四、尿素含量檢測(cè)： 建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測(cè)定，了解本批樣品情況，熟悉實(shí)驗(yàn)流程，避免實(shí)驗(yàn)樣本和試劑浪費(fèi)！ 1、樣本制備： 0.1g 組織樣本，加 1mL 的蒸餾水研磨，超聲萃取 10min 后定容至 1mL，室溫靜置 30min，12000rpm，常溫 離心 10min，上清液待測(cè)。 2、上機(jī)檢測(cè)： 1 酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min，設(shè)置溫度在 37℃，設(shè)定波長(zhǎng)到 460nm。 2 做實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本，找出適合本次檢測(cè)樣本的稀釋倍數(shù) D。 3 所有試劑解凍至室溫，在 EP 管中依次加入： 試劑名稱（μL） 測(cè)定管 對(duì)照管 空白管 （僅做一次） 標(biāo)準(zhǔn)管 （僅做一次） 樣本 50 50 蒸餾水 20 50 標(biāo)準(zhǔn)品 50 試劑一 20 20 20 試劑二 40 40 40 40 混勻，95℃沸水浴反應(yīng) 20min 蒸餾水 190 190 190 190 混勻，（若渾濁則 5000rpm 室溫離心 5min 后取上清液測(cè)定）取 200μL 至 96 孔板中，于 460nm 處讀取吸光值 A，△A=A 測(cè)定-A 對(duì)照。 【注】：測(cè)定管的 A 值若超過(guò) 1.5，可把樣本再進(jìn)行稀釋，稀釋倍數(shù) D 代入計(jì)算公式。 五、結(jié)果計(jì)算： 1、按照組織質(zhì)量計(jì)算： 尿素含量(mg/g)=(C 標(biāo)準(zhǔn)×V1)×△A÷(A 標(biāo)準(zhǔn)-A 空白)÷(V1÷V×W)×D=0.1×△A÷(A 標(biāo)準(zhǔn)-A 空白)÷W×D 尿素含量(mg/kg)=(C 標(biāo)準(zhǔn)×V1)×103×△A÷(A 標(biāo)準(zhǔn)-A 空白)÷(V1÷V×W)×D=100×△A÷(A 標(biāo)準(zhǔn)-A 空白)÷W×D C 標(biāo)準(zhǔn)---尿素標(biāo)品濃度，0.1mg/mL； D---稀釋倍數(shù)，未稀釋即為 1； 60.04---尿素分子量； W---取樣質(zhì)量，g； V---提取液體積，1mL； V1---加入樣本體積，0.05mL。