可溶性糖含量(SS)試劑盒

可溶性糖含量(SS)試劑盒

可溶性糖含量(SS)試劑盒

本試劑盒僅供科研使用 1 可溶性糖含量試劑盒說(shuō)明書(shū) (貨號(hào)：WS1050F 分光法 48 樣） 一、產(chǎn)品簡(jiǎn)介： 糖類(lèi)物質(zhì)是構(gòu)成植物體的重要組成成分之一，也是新陳代謝的主要原料和貯存物質(zhì)。糖 類(lèi)在濃硫酸作用下經(jīng)脫水反應(yīng)生成糠醛或羥甲基糖醛，生成的糠醛或羥甲基糖醛與蒽酮脫 水縮合，形成糠醛的衍生物，呈藍(lán)綠色物質(zhì)，其在可見(jiàn)光區(qū) 620nm 波長(zhǎng)處有吸收，且 其光吸收值在一定范圍內(nèi)與糖的含量成正比關(guān)系。該方法用于可溶性單糖、寡糖和多糖的 含量測(cè)定，具有靈敏度高﹑簡(jiǎn)便快捷﹑適用于微量樣品的測(cè)定等優(yōu)點(diǎn)。 該方法的特點(diǎn)是幾乎可以測(cè)定所有的碳水化合物（包括單糖：戊糖、已糖、蔗糖、糖原、 多縮葡萄糖等），所以用該方法測(cè)出的糖類(lèi)含量是溶液中全部可溶性糖類(lèi)含量。 二、試劑盒組分與配制 試劑名稱(chēng) 規(guī)格 保存要求 備注 試劑一 粉劑×2 支 4℃避光保存 試劑二 液體 5mL×1 瓶 4℃保存 標(biāo)準(zhǔn)品 粉劑×1 支 4℃保存 若重新做標(biāo)曲，則用到該試劑。 工作液配制：吸取 2mL 試劑二加入到一瓶試劑一中，混勻并充分溶解，即得工作液。 （如難溶解，可超聲溶解或者 60℃水浴溶解；剩余試劑 4℃保存一周）。 三、所需的儀器和用品： 可見(jiàn)分光光度計(jì)、1mL 玻璃比色皿（光徑 1cm）、沸水浴、可調(diào)式移液器、乙醇、濃硫 酸（自備）、研缽、和蒸餾水。 四、可溶性糖含量的測(cè)定： 建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測(cè)定，了解本批樣品情況，熟悉實(shí)驗(yàn)流程，避免實(shí)驗(yàn) 樣本和試劑浪費(fèi)！ 建議：選取樣本做幾個(gè)梯度的稀釋?zhuān)x取適合本次實(shí)驗(yàn)的稀釋倍數(shù) D。 1、樣本制備 ① 組織樣本： 稱(chēng)取 0.1g 樣本（若是干樣，如烘干煙葉等可取 0.05g；若是水分充足的樣本可取 0.2g）， 先加入 0.8mL 的 80%乙醇（自備：取 80mL 乙醇溶于 20mL 蒸餾水中），冰浴勻漿，倒入 有蓋離心管中，再用 80%乙醇沖洗研缽并轉(zhuǎn)移至同一 EP 管中，使 EP 管中粗提液終體積 定容為 1.5mL（若用自動(dòng)研磨機(jī)可直接加入 1.5mL 的 80%乙醇研磨）；置 50℃水浴 20min （封口膜纏緊，防止液體散失，且間隔 2min 振蕩混勻一次），冷卻后（若有損失，可加 80%乙醇補(bǔ)齊至 1.5mL），12000rpm，室溫離心 10min，取上清液備用。 ② 細(xì)菌/細(xì)胞樣本：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；取約 500 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì) 胞至 EP 管中，加入 1.5mL 的 80%乙醇（自備：取 80mL 乙醇溶于 20mL 蒸餾水中）超 聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次）；置 50℃水 浴 20min（封口膜纏緊，防止液體散失，且間隔 2min 振蕩混勻一次），冷卻后（若有 損失，可加 80%乙醇補(bǔ)齊至 1.5mL），12000rpm，室溫離心 10min，取上清液備用。 【注】:若增加樣本量，可按照細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量（104）：提取液（mL）為 500~1000：1 的比例進(jìn)行提取。 ③ 液體樣本： 澄清的液體樣本直接檢測(cè)，若渾濁則需 12000rpm，室溫離心 10min，取上清液備用。 2、上機(jī)檢測(cè)： ① 分光光度計(jì)預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 620nm，蒸餾水調(diào)零。本試劑盒僅供科研使用 2 ② 調(diào)節(jié)水浴鍋至 95℃，工作液用前需*全溶解。 ③ 提示：大多數(shù)樣本可溶性糖含量較高，為使ΔA 值在 1 以?xún)?nèi)，實(shí)驗(yàn)前可選取幾個(gè)樣本 做預(yù)測(cè)定，用蒸餾水把上清液稀釋成不同濃度，找出適合本次檢測(cè)樣本的稀釋倍數(shù) D。 （強(qiáng)調(diào)：嚴(yán)禁稀釋加熱反應(yīng)后的混合液，否則會(huì)出現(xiàn)渾濁現(xiàn)象）。 ④ 在 EP 管中依次加入： 試劑名稱(chēng)（μL） 測(cè)定管 空白管（僅做一管） 樣本 50 蒸餾水 150 200 工作液 60 60 濃硫酸(緩慢加入) 500 500 混勻，置 95℃水浴中 10min（蓋緊，以防止水分散失），冷卻至 室溫后，取全部澄清液體至1mL玻璃比色皿（光徑1cm），于620nm 讀取吸光值 A，ΔA=A 測(cè)定管-A 空白管。 【注】 若ΔA 的值接近零，可增加樣本加樣體積 V1（如由 25μL 增至 50μL，則蒸餾水 相應(yīng)減少），則改變后的 V1 代入公式重新計(jì)算。 五、結(jié)果計(jì)算： 1、標(biāo)準(zhǔn)方程為 y = 3.658x + 0.0203；x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（mg/mL），y 為吸光值ΔA。 2、按樣本重量計(jì)算： 可溶性糖(mg/g 重量)=[(ΔA-0.0203)÷3.658×V1]÷(W×V1÷V)×D =0.41×(ΔA-0.0203)÷W×D 3、按質(zhì)量分?jǐn)?shù)（%）計(jì)算： 可溶性糖(%重量)=[(ΔA-0.0203)÷3.658×V1]÷(W×V1÷V)×10-3× =[0.041×(ΔA-0.0203)÷W×D]% 4、按細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量計(jì)算： 可溶性糖(mg/104cell)=[(△A-0.0203)÷3.658]÷(500×V1÷V)×D =0.0008×(ΔA-0.0203)×D 5、按液體體積計(jì)算： 可溶性糖(mg/mL)=(ΔA-0.0203)÷3.658×D=0.273×(ΔA-0.0203)×D V---樣品提取液總體積，1.5mL； V1---加入樣本體積，0.05mL； W---樣本重量，g； 500---細(xì)胞數(shù)量，萬(wàn)； D---稀釋倍數(shù)，未稀釋即為 1。 附：標(biāo)準(zhǔn)曲線制作過(guò)程： 1 制備標(biāo)準(zhǔn)品母液（1mg/mL）：從標(biāo)準(zhǔn)品管中稱(chēng)量取出 2mg 至一新 EP 管中，再加 2mL 蒸餾水混勻溶解即 1mg/mL 的標(biāo)準(zhǔn)品（母液需在兩天內(nèi)用且-20℃保存）。 2 把母液用蒸餾水稀釋成六個(gè)濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)品：0, 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5. mg/mL。 3 依據(jù)測(cè)定管的加樣表操作，根據(jù)結(jié)果即可制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。