還原糖含量試劑盒

還原糖含量試劑盒

本試劑盒僅供科研使用 1 還原糖含量試劑盒說明書 （貨號：WS2050F 分光法 48 樣） 一、產品簡介： 還原糖廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中。植物體內的還原糖主要包括葡萄 糖、果糖和麥芽糖等，是最常見的單糖和雙糖。 在堿性條件下，DNS 試劑與還原糖共熱生成棕紅色氨基化合物，經過 480nm 到 540nm 波長掃描發現在 500nm 有特征吸收峰；在一定的濃度范圍內，還原糖含量與 500nm 吸光 度成線性關系，根據標準曲線，即可求出樣品中還原糖的量。 二、測試盒組成和配制： 試劑名稱 規格 保存要求 備注 試劑一 液體 6mL×1 瓶 4℃保存 標準品 粉體 mg×1 支 4℃保存 若重新做標曲，則用到該試劑 三、所需的儀器和用品： 可見分光光度計、1mL 玻璃比色皿（光徑 1cm）、水浴鍋、可調式移液器、研缽、乙醇。 四、還原糖含量檢測： 建議正式實驗前選取 2 個樣本做預測定，了解本批樣品情況，熟悉實驗流程，避免實驗 樣本和試劑浪費！ 1、樣本制備： ① 組織樣本： 稱取 0.1g 樣本（若是干樣，如烘干煙葉等可取 0.05g；若是水分充足的樣本可取 0.2g）， 先加入 0.8mL 的 80%乙醇（自備：取 80mL 乙醇溶于 20mL 蒸餾水中），冰浴勻漿，倒入 有蓋離心管中，再用 80%乙醇沖洗研缽并轉移至同一 EP 管中，使 EP 管中粗提液終體積 定容為 1.5mL（若用自動研磨機可直接加入 1.5mL 的 80%乙醇研磨）；置 50℃水浴 20min （封口膜纏緊，防止液體散失，且間隔 2min 振蕩混勻一次），冷卻后（若有損失，可加 80%乙醇補齊至 1.5mL），12000rpm，室溫離心 10min，取上清液備用。 【注】：若增加樣本量，可按照組織質量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例進行提取 ② 液體樣本： 澄清的液體樣本直接檢測，若渾濁則需 12000rpm，室溫離心 10min，取上清液備用。 2、上機檢測： 1 可見分光光度計預熱 30min 以上，調節波長至 500nm，蒸餾水調零。 2 調節水浴鍋至 95℃。 ③ 上清液稀釋：可先取 2 個樣本檢測，確定適合本批樣本的稀釋濃度 D：葉片類樣本可 稀釋 10 倍，含糖量高的果肉類樣本可稀釋 20 倍左右。 ④ 在 EP 管中加入下列試劑： 試劑（μL） 測定管 空白管（僅做一次） 樣本 100 蒸餾水 100 試劑一 100 100 混勻，在 95℃水浴中加熱 10min（蓋緊封口，防止水分散失）， 取出后立即過冷水冷卻至室溫。 蒸餾水 1000 1000 混勻，全部液體轉移至 1mL 玻璃比色皿中，500nm 讀取吸光值 A， ΔA=A 測定-A 空白。 【注】：若ΔA 值大于 1.5，樣本可用蒸餾水再稀釋，稀釋倍數 D 代入公式計算。本試劑盒僅供科研使用 五、結果計算： 1、 標準曲線方程為 y =1.3936x-0.0296；x 為標準品濃度（mg/mL），y 為吸光值ΔA。 2、按樣本重量計算： 還原糖(mg/g 重量)=[(ΔA+0.0296)÷1.3936×V1]÷(W×V1÷V)×D =1.076×(ΔA+0.0296)÷W×D 3、按質量分數（%）計算： 還原糖(%重量)=[(ΔA+0.0296)÷1.3936×V1]÷(W×V1÷V)×10-3× =[0.1076×(ΔA+0.0296)÷W×D]% 4、按液體體積計算： 還原糖(mg/mL)=(ΔA+0.0296)÷1.3936×D=0.7176×(ΔA+0.0296)×D V---樣品提取液總體積，1.5mL； V1---測定時所取樣本的體積，0.1mL； W---樣本質量，g； D---自行稀釋倍數，未稀釋即為 1。 附：標準曲線制作過程： 1 制備標準品母液（1mg/mL）：從標準品管中稱量取出 2mg 至一新 EP 管中，再加 2mL 蒸餾水混勻溶解即 1mg/mL 的葡萄糖（母液需在兩天內用且-20℃保存）。 2 把母液用蒸餾水稀釋成六個濃度梯度的標準品：0, 0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 1. mg/mL。也可 根據實際樣本來調整標準品濃度。 3 依據測定管的加樣表操作，根據結果即可制作標準曲線。 2