總糖含量試劑盒,微板法

總糖含量試劑盒,微板法

總糖含量試劑盒,微板法

本試劑盒僅供科研使用 1 總糖含量試劑盒說(shuō)明書 （貨號(hào)：WS3050W 微板法 96 樣） 一、產(chǎn)品簡(jiǎn)介： 糖類物質(zhì)是構(gòu)成植物體的重要組成成分之一，也是新陳代謝的主要原料和貯存物質(zhì)。總糖 也可稱為碳水化合物，包括可溶性的單糖，二糖以及不溶性的淀粉，纖維素，幾丁質(zhì)等。 總糖酸水解為還原糖，在堿性條件下，DNS 試劑與還原糖共熱后被還原成氨基化合物， 在過(guò)量的 NaOH 堿性溶液中呈桔紅色，經(jīng)過(guò) 500nm 到 540nm 波長(zhǎng)掃描在 500nm 處有吸 收峰，并且在一定的濃度范圍內(nèi)，還原糖含量與 500nm 吸光度成線性關(guān)系，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線， 以此測(cè)定樣品中的還原糖含量，即樣品中的總糖含量。 二、試劑盒的組成和配制： 試劑名稱 規(guī)格 保存要求 備注 提取液 液體 80mL×1 瓶 4℃保存 試劑一 空瓶×1 個(gè) 4℃保存 臨用前加 30mL 水，再向水中緩 慢加入 30mL 的市售鹽酸（鹽酸 有腐蝕性，加的過(guò)程中需緩慢謹(jǐn) 慎加入），混勻備用。 試劑二 液體 60mL×1 瓶 4℃保存 試劑三 液體 12mL×1 瓶 4℃保存 標(biāo)準(zhǔn)品 粉體 mg×1 支 4℃保存 若重新做標(biāo)曲，則用到該試劑 三、所需的儀器和用品： 酶標(biāo)儀、96 孔板、水浴鍋、可調(diào)式移液器、研缽、蒸餾水、鹽酸。 四、總糖含量檢測(cè)： 建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測(cè)定，熟悉實(shí)驗(yàn)流程，避免實(shí)驗(yàn)樣本和試劑浪費(fèi)！ 1、樣本制備： ① 組織樣本： 稱取約 0.1g 樣品（水分充足的樣本可取 0.5g）， 750μL 提取液，勻漿后加入 500μL 試 劑一，封口置于 90℃水浴中加熱 30min，并且 15min 振蕩一次，用冷水冷卻至室溫， 加入 500μL 試劑二，用蒸餾水定容至 2mL，混勻，12000rpm，25℃離心 10min，取上 清液備用。 【注】：若增加樣本量，可按照組織質(zhì)量（g）：蒸餾水體積(mL)為 1：5~10 的比例進(jìn)行提取 ② 液體樣本： 取 0.1mL 液體樣本加入 750μL 提取液，勻漿后加入 500μL 試劑一，封口置于 90℃水浴 中 30min，并且 15min 振蕩一次，用冷水冷卻至室溫，加入 500μL 試劑二，用蒸餾水定 容至 2mL，混勻，12000 rpm，25℃離心 10min，取上清液備用。 2、上機(jī)檢測(cè)： ① 酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 500nm。 ② 提示：大多數(shù)樣本總糖含量較高，為使ΔA 值在 1 以內(nèi)，實(shí)驗(yàn)前可選取幾個(gè)樣本做預(yù) 測(cè)定，用蒸餾水把上清液稀釋成不同濃度，找出適合本次檢測(cè)樣本的稀釋倍數(shù) D。 ③ 調(diào)節(jié)水浴鍋至 95℃。在 EP 管中依次加入： 試劑（μL） 測(cè)定管 空白管（僅做一次） 樣本 100 蒸餾水 100 試劑三 100 100本試劑盒僅供科研使用 2 混勻，在 95℃水浴中 10min（蓋緊封口，以防止水分散失）， 取出后立即過(guò)冷水冷卻至室溫。 蒸餾水 1000 1000 混勻，取 200μL 于 96 孔板中，500nm 讀取吸光值 A， △A=A 測(cè)定-A 空白。 【注】：若△A 值大于 1.5，樣本可用蒸餾水再行稀釋，稀釋倍數(shù) D 代入計(jì)算公式計(jì)算。 五、結(jié)果計(jì)算： 1、 標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為 y = 7.6134x - 0.0321；x 為標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)量（mg），y 為△A。 2、按樣本鮮重計(jì)算： 總糖(mg/g 重量)=[(△A+0.0321)÷7.6134]÷(W×V1÷V)×D =2.63×(△A+0.0321)÷W×D 3、按液體體積計(jì)算： 總糖(mg/mL)=[(△A+0.0321)÷7.6134]÷[V2×V1÷V]×D =26.3×(△A+0.0321)×D V---樣品提取液總體積，2mL； V1---測(cè)定時(shí)所取樣品提取液的體積，0.1mL； V2---液體樣品量，0.1mL； W---樣本質(zhì)量，g； D---稀釋倍數(shù)，未稀釋即為 1。 附：標(biāo)準(zhǔn)曲線制作過(guò)程： 1 制備標(biāo)準(zhǔn)品母液（1mg/mL）：從標(biāo)準(zhǔn)品管中稱量取出 2mg 至一新 EP 管中，再加 2mL 蒸餾水混勻溶解即 1mg/mL 的葡萄糖（母液需在兩天內(nèi)用且-20℃保存）。 2 把母液用蒸餾水稀釋成六個(gè)濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)品：0, 0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 1. mg/mL。也可 根據(jù)實(shí)際樣本來(lái)調(diào)整標(biāo)準(zhǔn)品濃度。 3 依據(jù)測(cè)定管的加樣表操作，根據(jù)結(jié)果即可制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。