總糖含量試劑盒

總糖含量試劑盒

本試劑盒僅供科研使用 1 總糖含量試劑盒說明書 （貨號：WS3050F 分光法 48 樣） 一、產品簡介： 糖類物質是構成植物體的重要組成成分之一，也是新陳代謝的主要原料和貯存物質。總 糖也可稱為碳水化合物，包括可溶性的單糖，二糖以及不溶性的淀粉，纖維素，幾丁質等。 總糖酸水解為還原糖，在堿性條件下，DNS 試劑與還原糖共熱后被還原成氨基化合物， 在過量的 NaOH 堿性溶液中呈桔紅色，經過 500nm 到 540nm 波長掃描在 500nm 處有 吸收峰，并且在一定的濃度范圍內，還原糖含量與 500nm 吸光度成線性關系，根據標準曲 線，以此測定樣品中的還原糖含量，即樣品中的總糖含量。 二、試劑盒的組成和配制： 試劑名稱 規格 保存要求 備注 提取液 液體 40mL×1 瓶 4℃保存 試劑一 空瓶×1 個 4℃保存 臨用前加 15mL 水，再向水中緩 慢加 15mL 的市售鹽酸（鹽酸有 腐蝕性，加的過程中需緩慢謹慎 加入），混勻備用。 試劑二 液體 30mL×1 瓶 4℃保存 試劑三 液體 6mL×1 瓶 4℃保存 標準品 粉體 mg×1 支 4℃保存 若重新做標曲，則用到該試劑 三、所需的儀器和用品： 可見分光光度計、1mL 玻璃比色皿（光徑 1cm）、水浴鍋、可調式移液器、研缽、鹽酸。 四、總糖含量檢測： 建議正式實驗前選取 2 個樣本做預測定，了解本批樣品情況，熟悉實驗流程，避免實驗 樣本和試劑浪費！ 1、樣本制備： ① 組織樣本： 稱取約 0.1g 樣品（水分充足的樣本可取 0.5g）， 750μL 提取液，勻漿后加入 500μL 試 劑一，封口置于 90℃水浴中加熱 30min，并且 15min 振蕩一次，用冷水冷卻至室溫， 加入 500μL 試劑二，用蒸餾水定容至 2mL，混勻，12000rpm，25℃離心 10min，取上 清液備用。 【注】：若增加樣本量，可按照組織質量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例進行提取。 ② 液體樣本： 取 0.1mL 液體樣本加入 750μL 提取液，勻漿后加入 500μL 試劑一，封口置于 90℃水浴 中 30min，并且 15min 振蕩一次，用冷水冷卻至室溫，加入 500μL 試劑二，用蒸餾水定 容至 2mL，混勻，12000 rpm，25℃離心 10min，取上清液備用。 2、上機檢測： ① 可見分光光度計預熱 30min 以上，調節波長至 500nm，蒸餾水調零。 ② 提示：大多數樣本總糖含量較高，為使ΔA 值在 1 以內，實驗前可選取幾個樣本做預 測定，用蒸餾水把上清液稀釋成不同濃度，找出適合本次檢測樣本的稀釋倍數 D。 ③ 調節水浴鍋至 95℃，在 EP 管中依次加入： 試劑（μL） 測定管 空白管（僅做一次） 樣本 100 蒸餾水 100 試劑三 100 100本試劑盒僅供科研使用 2 混勻，在 95℃水浴中 10min（蓋緊封口，以防止水分散失）， 取出后立即過冷水冷卻至室溫。 蒸餾水 1000 1000 混勻，全部液體轉移到 1mL 玻璃比色皿中，500nm 讀取吸光值 A， △A=A 測定-A 空白。 【注】：若△A 值大于 1.5，樣本可用蒸餾水再行稀釋，稀釋倍數 D 代入計算公式計算。 五、結果計算： 1、 標準曲線方程為 y =10.217x - 0.0305；x 為標準品質量（mg），y 為△A。 2、按樣本鮮重計算： 總糖(mg/g 重量) =[(△A+0.0305)÷10.217]÷(W×V1÷V)×D =1.96×(△A +0.0305)÷W×D 3、按液體體積計算： 總糖(mg/mL)=[(△A+0.0305)÷10.217]÷[V2×V1÷V]×D =19.6×(△A +0.0305)×D V---樣品提取液總體積，2mL； V1---測定時所取樣品提取液的體積，0.1mL； V2---液體樣品量，0.1mL； W---樣本質量，g； D---稀釋倍數，未稀釋即為 1。 附：標準曲線制作過程： 1 制備標準品母液（1mg/mL）：從標準品管中稱量取出 2mg 至一新 EP 管中，再加 2mL 蒸餾水混勻溶解即 1mg/mL 的葡萄糖（母液需在兩天內用且-20℃保存）。 2 把母液用蒸餾水稀釋成六個濃度梯度的標準品：0, 0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 1. mg/mL。也可 根據實際樣本來調整標準品濃度。 3 依據測定管的加樣表操作，根據結果即可制作標準曲線。