山li醇氧化酶（SOX)測定試劑盒,微板法

山li醇氧化酶（SOX)測定試劑盒,微板法

山li醇氧化酶（SOX)測定試劑盒,微板法

本試劑盒僅供科研使用 1 山*醇氧化酶（SOX）測定試劑盒說明書 （貨號：WS2750W 微板法 48 樣） 一、產品簡介： 山*醇作為一種運輸糖，被卸載到果實中時轉化成其他糖類物質，山*醇氧化酶 （sorbitol oxidase，SOX）就是山*醇轉化和利用過程中的關鍵酶之一，該酶與果實的 品質以及果實中糖類物質的積累密切相關。 山*醇氧化酶（SOX）催化山*醇生成葡萄糖，葡萄糖進一步與 3,5－二硝基水楊酸 反應，生成棕紅色氨基化合物，經光譜掃描在 540nm 有特征光吸收，在一定范圍內 540nm 光吸收增加速率與山*醇氧化酶（SOX）活性成正比。 二、試劑盒的組成和配制： 試劑名稱 規格 保存要求 備注 提取液 液體 60mL×1 瓶 4℃保存 試劑一 液體 7mL×1 瓶 4℃保存 試劑二 粉劑 mg×1 支 4℃保存 用前加入 2.5mL 蒸餾水充分溶解 備用；用不完的試劑 4℃保存; 試劑三 液體 10mL×1 瓶 4℃保存 標準品 粉體 mg×1 支 4℃保存 若重新做標曲，則用到該試劑 三、所需的儀器和用品： 酶標儀、96 孔板、低溫離心機、水浴鍋、可調式移液器、研缽、冰和蒸餾水。 四、山*醇氧化酶（SOX）活性測定： 建議正式實驗前選取 2 個樣本做預測定，了解本批樣品情況，熟悉實驗流程，避免實驗 樣本和試劑浪費！ 1、樣本制備： 稱樣本 0.1g（水分充足的樣本可取 0.5g）于研缽中，加入 1mL 提取液，冰浴勻漿后 轉入離心管中。12000rpm，4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。 【注】：若增加樣本量，可按照組織質量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例進行提取 2、上機檢測： 1 酶標儀預熱 30min 以上，調節波長至 540nm。 2 在 EP 管中依次加入： 試劑名稱（μL） 測定管 對照管 樣本 20 20 試劑一 60 80 試劑二 20 混勻，30℃（水浴鍋或恒溫培養箱）下孵育 30min 試劑三 100 100 混勻，沸水浴（95-100℃）（可用封口膜纏緊 EP 管）5min， 流水冷卻 蒸餾水 200 200 混勻，取出 200μL 至 96 孔板中，于 540nm 處讀取吸光值 A， △A=A 測定-A 對照（每個樣本自身需做一個自身對照）。 【注】：1.若吸光值大于 1.8，可減少樣本加樣量 V1（如減至 10μL，則試劑一相應增加），則改 變后的加樣體積 V1 需代入計算公式重新計算。本試劑盒僅供科研使用 2 2.若ΔA 值在零附近徘徊，可延長 30℃水浴時間（如增至 60min），則改變后的反應時間 T 需代入公式重新計算。 五、結果計算： 1、標準曲線方程為 y = 0.0125x - 0.0338；x 為標準品質量（μg），y 為ΔA。 2、按蛋白濃度計算： 單位定義：37℃每毫克蛋白每分鐘產生 1μg 葡萄糖定義為一個酶活性單位。 山*醇氧化酶（SOX）（μg/min/mg prot）=[(ΔA+0.0338) ÷0.0125]÷(V1×Cpr ) ÷T =133.3×(ΔA+0.0338) ÷Cpr 3、按鮮重計算： 單位的定義：37℃每克組織每分鐘產生 1μg 葡萄糖定義為一個酶活性單位。 山*醇氧化酶（SOX）（μg/min/g 鮮重）=[(ΔA+0.0338) ÷0.0125]÷(W×V1÷V) ÷T =133.3×(ΔA+0.0338)÷W V----加入提取液體積，1mL； V1----加入反應體系中樣本體積，0.02mL； T----反應時間，30min； W----樣本鮮重，g； Cpr----樣本蛋白質濃度，mg/mL；建議使用本公司的 BCA 蛋白含量檢測試劑盒； 附：標準曲線制作過程： 1 制備標準品母液（5mg/mL）：向標準品 EP 管里面加入 1mL 蒸餾水（母液需在兩天 內用且-20℃保存）。 2 把母液稀釋成六個濃度梯度的標準品：0, 1, 2, 3, 4, 5. mg/mL。也可根據實際樣本來 調整標準品濃度。 3 按照測定管的加樣順序依次加樣操作，根據結果即可制作標準曲線。