葡萄糖氧化酶（GOD）活性測定試劑盒,微板法

葡萄糖氧化酶（GOD）活性測定試劑盒,微板法

葡萄糖氧化酶（GOD）活性測定試劑盒,微板法

本試劑盒僅供科研使用 1 葡萄糖氧化酶（GOD）活性測定試劑盒說明書 （貨號：WS1950W 微板法 96 樣） 一、產品簡介： 葡萄糖氧化酶（GOD，EC 1.1.3.4）是一種常見于多種微生物中的氧化還原酶，葡萄糖 氧化酶催化葡萄糖和氧反應生成葡萄糖酸和過氧化氫，過氧化氫和特異顯色劑反應產生 （粉）紅色產物，該產物在510nm有吸收峰，進而得到葡萄糖氧化酶酶活性大小。 二、試劑盒組分與配制： 試劑名稱 規格 保存要求 備注 提取液 液體 100mL×1 瓶 4℃保存 試劑一 液體 6mL×1 瓶 4℃保存 試劑二 液體 10mL×1 瓶 4℃保存 試劑三 粉體 mg×2 支 4℃保存 用前甩幾下使粉體落入底部，每支 加 1.2mL 的蒸餾水溶解備用。 標準管 液體 mL×1 支 4℃保存 三、所需儀器和用品： 酶標儀、96 孔板、天平、移液器、研缽、離心機、蒸餾水。 四、葡萄糖氧化酶（GOD）活性測定： 建議正式實驗前選取 2 個樣本做預測定，了解本批樣品情況，熟悉實驗流程，避免實驗 樣本和試劑浪費！ 1、樣本制備： ① 組織樣本： 0.1g 組織樣本（水分充足的樣本建議取 0.2g 左右），加 1mL 的蒸餾水研磨，粗提液 全部轉移到 EP 管中，12000rpm，4℃離心 10min，上清液待測。 ② 細胞/細菌樣本： 先收集細胞到離心管內，離心后棄上清；取約 500 萬細胞/細菌加入 1mL 蒸餾水或 PBS 或生理鹽水，超聲波破碎細胞/細菌（冰浴，功率 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復 30 次）；12000rpm 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。 【注】：若增加樣本量，可按照細胞數量（104）：提取液（mL）為 500~1000：1 的比例進行提取。 2、上機檢測： 1 酶標儀預熱 30min，設定波長到 510nm。 2 所有室溫至室溫（25℃）。在 96 孔板中依次加入： 試劑名稱（μL） 測定管 試劑一 60 試劑二 100 樣本 20 混勻，37℃孵育 5min 試劑三 20 混勻，于 510nm 下讀取吸光值 A1，37℃孵育 20min 后讀取吸光值 A2，△A =A2-A1。 【注】：若△A 值在零附近，則增加樣本加樣體積 V1（如增至 50μL，則試劑一相應減少）， 或延長反應時間 T（如延長至 40min 或 60min），則改變后的 V1 和 T 需代入公式重新計算。本試劑盒僅供科研使用 2 五、結果計算： 1、標準曲線：y = 11.151x - 0.0212：x 為 H2O2標準品(μmoL)，y 為ΔA。 2、按樣本鮮重計算： 單位定義：在 37℃，每克組織每小時生成 1μmoLH2O2 定義為一個酶活單位（U）。 GOD (μmoL/h/g 鮮重)=[(ΔA+0.0212)÷11.151]÷(W×V1÷V)÷T =13.45×(ΔA+0.0212)÷W 3、按樣本蛋白濃度計算： 單位定義：在 37℃，每毫克組織蛋白每小時生成 1μmoLH2O2 定義為一個酶活單位（U）。 GOD (μmoL/h/mg prot)=[(ΔA+0.0212)÷11.151]÷(V1×Cpr) ÷T=13.45×(ΔA+0.0212)÷Cpr 4、按細胞/細菌數量計算： 單位定義：在 37℃，每 104個細胞/細菌每小時生成 1μmoLH2O2 定義為一個酶活單位（U）。 GOD (μmoL/h/104 cell)=[(ΔA+0.0212)÷11.151]÷(500×V1÷V)÷T=0.027×(△A+0.0212) V---加入提取液體積，1 mL； V1---加入樣本體積，0.02mL； T---反應時間，20min=1/3h； W---樣本質量，g； 500---細胞數量，萬； Cpr---樣本蛋白質濃度，mg/mL，建議使用本公司的 BCA 蛋白含量檢測試劑盒。 附：標準曲線制作過程： 1 制備標準品母液（250μmol/mL）。 2 把母液稀釋成以下濃度：0，0.5，1，1.5，2，2.5μmol/mL。也可根據實際調整濃度。 3 在 96 孔板中直接加入：20μL 標準品+80μL 試劑一+100μL 試劑二，混勻于 510nm 處 讀值，依據結果即可制作標準曲線。