木質素( Lignin)含量試劑盒,微板法

木質素( Lignin)含量試劑盒,微板法

木質素( Lignin)含量試劑盒,微板法

本試劑盒僅供科研使用 1 木質素含量測定說明書 （貨號：WS7170W 微板法 96 樣） 一、產品簡介： 木質素是一種含有羥基和甲氧基的高分子芳香族化合物，是苯丙烷的衍生物，作為植物 的化學成分與纖維素及半纖維素共同形成植物體骨架，大大提高了細胞壁的機械強度，為 植物提供支持，適應環境，抗蟲病害和抗倒伏的生理功能，同時，在木質素合成過程中產 生的一些前體物質酚類和自由基可以破壞原菌相關酶類的生物活性與細胞膜的通透性，從 而使植物有一定的自我防御能力。 本試劑盒采用乙酰化法，使木質素中的酚羥基發生乙酰化，其在280nm處有特征吸收峰， 280nm的吸光值高低與木質素含量正相關。 二、試劑盒組分與配制： 試劑名稱 規格 保存要求 備注 試劑一 液體 80mL×1 瓶 4℃保存 該試劑具有強揮發性和一定 的毒性，注意在通風櫥操作 并且每次用完需密封保存。 試劑二 液體 40mL×1 瓶 4℃保存 三、所需的儀器和用品： 酶標儀、96 孔 UV 板、低溫離心機、水浴鍋、移液器、蒸餾水、冰乙酸。 四、木質素含量的測定： 1、樣本制備： ① 取適量組織樣本烘干并磨碎，過 40 目篩備用；取 2mg 過篩的粉末組織，加 1.5mL 的 80%乙醇，渦旋振蕩混勻，50℃水浴 20min（間隔 3min 晃動幾下），取出流水冷 卻后，12000rpm，25℃10min，棄上清，留沉淀（盡量保留沉淀）。 ② 向沉淀中加入 1mL 的 80%乙醇震蕩混勻 2min，50℃水浴 20min（間隔 3min 晃動幾 下），取出流水冷卻后，12000rpm，25℃10min，棄上清，留沉淀（盡量保留沉淀）， 95℃烘干沉淀，待用。 2、上機檢測： ① 酶標儀預熱 30 min，設置溫度在 25oC，設定波長到 280nm。 ② 選用螺旋蓋式 2mL 的 EP 管，按照下表加樣： 試劑（μL） 測定管 空白管 樣本制備得到的沉淀 試劑一 （沿管壁緩緩加入） 750 750 混勻，70℃水浴 30min（管口用封口膜封緊或者用重物壓實），隔 15min 輕輕震蕩一次，結束后自然冷卻至室溫。 （整個操作過程，謹慎操作，注意防護） 試劑二 （沿管壁緩緩加入） 300 300 乙酸 450 450 振蕩充分混勻，總體積為 1.5mL（即為待檢混合液）。本試劑盒僅供科研使用 2 【注】1.若是木本植物也可考慮添加高氯酸進行乙酰化，即樣本制備得到的沉淀+750μL 試劑一+30μL 高氯酸（也需緩慢加入，謹慎操作），充分混勻，70℃水浴 30min （整個操作過程同上），加 300μL 試劑二和 420μL 乙酸，總體積仍為 1.5mL， 后續操作過程同上。 2.若 A 測定管大于 1.8，在最后一步用 96 孔 UV 板檢測時：取 20μL 澄清上清 液+180μL 乙酸至 96 孔板中（空白管也一樣操作），則上清液相當于稀釋了 10 倍，則計算公式中的 10 替代 2 參與計算。 五、結果計算： 1、標準曲線方程：y = 10.615x - 0.003；x 為標準品濃度（mg/mL），y 為ΔA。 2、按樣本重量計算： 木質素(mg /g 重量)=[(ΔA+0.003)÷10.615]×V1÷W×2 =0.1413×(ΔA+0.003)÷W×2 V1---定容后總體積，1.5mL； 2---至 96 孔 UV 板中檢測時上清液稀釋倍數； W---樣本重量，1.5mg=1.5×10-3g。 注：由于冰乙酸易揮發，請混勻后立即測定！ 室溫下 5000rpm 離心 5min，取 100μL 澄清上清液于 96 孔 UV 板中， 再加 100μL 乙酸至 96 孔中，于 280nm 下讀取吸光值 A。分別記為 A 空白管和 A 測定管，ΔA=A 測定管-A 空白管。 注：由于冰乙酸易揮發，可分小批測定（如每次測定 5 個樣本）。