γ-氨基丁酸(GABA)含量試劑盒

γ-氨基丁酸(GABA)含量試劑盒

γ-氨基丁酸(GABA)含量試劑盒

本試劑盒僅供科研使用 1 γ-氨基丁酸（GABA）含量試劑盒說明書 （貨號：WS6011F 分光法 48 樣） 一、產品簡介： 4-氨基丁酸（GABA）廣泛分布在動植物體中。在動物體內 GABA 幾乎只存在于神經 組織中。在植物中如豆屬、參屬、中草藥等的種子、根莖和組織液中都含有 G A B A， 且與植物的環境應激反應有關。 4-氨基丁酸（GABA）在堿性溶液中與次氯酸鹽和*酚反應生成藍綠色物質，通過檢 測該有色物質在 645nm 波長處的值，即可得出樣本中 GABA 的含量。 二、試劑盒的組分與配制： 試劑名稱 規格 保存要求 備注 提取液 液體 60mL×1 瓶 4℃保存 試劑一 液體 40mL×1 瓶 4℃保存 試劑二 液體 10mL×1 瓶 4℃保存 試劑三 液體 20mL×1 瓶 4℃保存 標準品 粉體 mg×1 支 4℃保存 若重新做標曲，則用到該試劑。 三、所需的儀器和用品： 可見分光光度計、1mL 玻璃比色皿（光徑 1cm）、可調式移液槍、水浴鍋、離心機、 研缽、蒸餾水。 四、γ-氨基丁酸（GABA）含量測定： 建議正式實驗前選取 2 個樣本做預測定，了解本批樣品情況，熟悉實驗流程，避免實 驗樣本和試劑浪費！ 1、樣本制備： ① 組織樣本： 稱取約 0.1g 組織樣本加入研缽中，加入 1mL 提取液，在冰上進行勻漿，12000rpm， 4℃或室溫離心 10min，取上清液待測。 【注】：若增加樣本量，可按照組織質量（g）：提取液(mL)為 1：5~10 的比例進行提取。 ② 細菌/細胞樣本： 先收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；取約 500 萬細菌或細胞加入 1mL 提取液，超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復 30 次）； 12000rpm 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。 【注】：若增加樣本量，可按照細菌/細胞數量（104）：提取液（mL）為 500~1000：1 的比例進行提取。 ③ 液體樣本：澄清的液體樣本直接測定，若渾濁則離心后取上清檢測。 2、上機檢測： ① 可見分光光度計預熱 30 min，調節波長到 645 nm，蒸餾水調零。 ② 所有試劑解凍至室溫（25℃）。 ③ 在 EP 管中依次加入： 試劑名稱（μL） 測定管 對照管 樣本 100 100 試劑一 60 660 試劑二 200 試劑三 400 混勻，沸水浴（95-100℃）10min，冰浴至室溫，呈現藍綠色顏本試劑盒僅供科研使用 2 色，若渾濁需 12000rpm 離心 5min，取全部澄清上清液轉移至 1mL 玻璃比色皿（光徑 1cm）中，于 645nm 處讀取各管的 A 值， △A=A 測定-A 對照（每個樣本需做一個自身對照）。 【注】1.若測定管的 A 值大于 1，則需將樣本進行稀釋（用蒸餾水稀釋），稀釋倍數 D 需代入計算公式重新計算。 2.若 A 測定-A 對照的差值在零附近徘徊，則可增加樣本取樣量（如增至 0.2g）， 則取樣質量 W 代入計算公式重新計算。 五、結果計算： 1、標準曲線：y = 0.0086x - 0.0033，x 為標準品質量(μg)，y 為吸光值ΔA。 2、按樣本質量計算: GABA 含量(μg/g 重量)=[(ΔA+0.0033) ÷0.0086]÷(W×V1÷V)×D =1162.8×(ΔA+0.0033) ÷W×D 3、按細胞數量計算： GABA 含量(μg/104 cell)=[(ΔA+0.0033) ÷0.0086]÷(500×V1÷V)×D=2.33×(ΔA+0.0033)×D 4、液體中 GABA 含量計算： GABA 含量(μg/mL)=[(ΔA+0.0033) ÷0.0086]÷V1×D=1162.8×(ΔA+0.0033)×D V---提取液體積，1mL； V1---樣本加入體積，0.1mL； D---稀釋倍數,未稀釋即為 1； W---樣本取樣質量； 500---細胞數量，萬。 附：標準曲線制作過程： 1 標準品母液（2mg/mL）：標準品臨用前加 1mL 蒸餾水溶解。 2 把母液稀釋成以下濃度梯度的標準品：0, 0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 1, 1.2 mg/mL。也可根據實際樣本來調整 標準品濃度。 3 按照測定管的加樣體系操作，根據結果即可制作標準曲線。