尿素(Urea)/尿素氮含量(脲酶法)試劑盒

尿素(Urea)/尿素氮含量(脲酶法)試劑盒

本試劑盒僅供科研使用 1 尿素（Urea）含量（酶法）檢測試劑盒說明書 （貨號：WS1021F 分光法 48 樣） 一、產(chǎn)品簡介： 尿素（Urea）又稱碳酰胺，舊稱尿素氮（BUN），是哺乳動物和某些魚類體內(nèi)蛋白 質(zhì)代謝分解的主要含氮產(chǎn)物，也是目前含氮量的氮肥。 該試劑盒利用尿素在脲酶的作用下水解產(chǎn)生氨離子和二氧化碳，氨離子在堿性介質(zhì) 中與酚顯色劑生成藍(lán)色物質(zhì)，該物質(zhì)的生成量與尿素含量成正比。通過于625nm處檢 測該有色物質(zhì)含量進(jìn)而得出尿素氮含量。 二、試劑盒組分與配制： 試劑名稱 規(guī)格 保存要求 備注 試劑一 粉體 mg×1 支 -20℃保存 臨用前甩幾下使粉體落入底部，再加 1.7mL 的蒸餾水溶解備用。 試劑二 液體 4mL×1 瓶 4℃保存 試劑三 試劑三 A×2 支 試劑三 B×1 支 4℃保存 臨用前向一支試劑三 A 中加入 77μL 的 試劑三 B，混勻備用。 標(biāo)準(zhǔn)管 粉體 mg×2 支 4℃保存 每支臨用前加1mL蒸餾水溶解，即濃度 為6mg/mL的尿素，檢測前再用蒸餾水 稀釋200倍（5:995）即成0.03mg/mL （0.5mmol/L）的尿素。 三、所需儀器和用品： 可見分光光度計、1mL 玻璃比色皿（光徑 1cm）、天平、移液器、離心機(jī)、蒸餾水。 四、尿素（Urea）含量檢測： 建議正式實驗前選取 2 個樣本做預(yù)測定，了解本批樣品情況，熟悉實驗流程，避免實 驗樣本和試劑浪費！ 1、樣本制備： ① 液體樣品：澄清的液體可直接檢測；若渾濁則離心后取上清液檢測。 ② 細(xì)菌/細(xì)胞樣本： 先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；取約 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 生 理鹽水，超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次）；12000rpm 室溫離心 10min，取上清，置冰上待測。 【注】：若增加樣本量，可按照細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量（104）：提取液（mL）為 500~1000：1 的比例進(jìn)行提取。 2、上機(jī)檢測： ① 可見分光光度計預(yù)熱 30min，設(shè)置溫度在 37℃，設(shè)定波長到 625nm。 ② 做實驗前選取 2 個樣本，找出適合本次檢測樣本的稀釋倍數(shù) D（如：尿液樣本可用 蒸餾水稀釋 100 倍）。 ③ 所有試劑解凍至室溫，在 EP 管中依次加入：本試劑盒僅供科研使用 2 試劑名稱 （μL） 測定管 空白管 （僅做一次） 標(biāo)準(zhǔn)管 （僅做一次） 樣本 60 蒸餾水 60 標(biāo)準(zhǔn)品 60 試劑一 30 30 30 蒸餾水 550 550 550 混勻，37℃避光反應(yīng) 15min 試劑二 80 80 80 試劑三 80 80 80 混勻，37℃避光反應(yīng) 20min，全部澄清液體轉(zhuǎn)移至 1mL 玻 璃比色皿（光徑 1cm）中，于 625nm 處讀取吸光值 A，△A=A 測定-A 空白。 【注】：1.測定管 A 值若超過 1.5，可把樣本用生理鹽水或蒸餾水進(jìn)行稀釋，稀釋倍數(shù) D 代入計 算公式。 2.若△A 差值在零附近徘徊，可增加樣本加樣量 V1（如增至 120μL，則蒸餾水相應(yīng)減少， 保持總體積不變；空白管和標(biāo)準(zhǔn)管維持不變），則改變后 V1 需代入公式重新計算。 五、結(jié)果計算： 1、按液體體積計算： 尿素含量(mg/L)=(C 標(biāo)準(zhǔn)×V1)×103×△A÷(A 標(biāo)準(zhǔn)-A 空白)÷V1×D =30×△A÷(A 標(biāo)準(zhǔn)-A 空白)×D 尿素含量(mmol/L)=(C 標(biāo)準(zhǔn)×V1)÷60.04×103×△A÷(A 標(biāo)準(zhǔn)-A 空白)÷V1×D =0.5×△A÷(A 標(biāo)準(zhǔn)-A 空白)×D 2、按細(xì)胞數(shù)量計算： 尿素含量(ng/104 cell)=(C 標(biāo)準(zhǔn)×V 標(biāo))×106×△A÷(A 標(biāo)準(zhǔn)-A 空白)÷(500×V1÷V)×D =60×△A÷(A 標(biāo)準(zhǔn)-A 空白)×D 尿素含量(nmol/104 cell)=(C 標(biāo)準(zhǔn)×V 標(biāo))÷60.04×106×△A÷(A 標(biāo)準(zhǔn)-A 空白)÷(500×V1÷V)×D =△A÷(A 標(biāo)準(zhǔn)-A 空白)×D C 標(biāo)準(zhǔn)---尿素標(biāo)品濃度，0.03mg/mL； D---稀釋倍數(shù)，未稀釋即為 1； V1---加入樣本體積，0.06mL； V 標(biāo)---加入標(biāo)準(zhǔn)品體積，0.06mL； V---提取液體積，1mL； 60.04---尿素分子量； 500---細(xì)胞數(shù)量，萬。