肌酐 (Cr) 含量試劑盒(肌氨酸氧化酶法)

肌酐 (Cr) 含量試劑盒(肌氨酸氧化酶法)

肌酐 (Cr) 含量試劑盒(肌氨酸氧化酶法)

本試劑盒僅供科研使用 1 肌酐（CRE）含量（肌氨酸氧化酶法）檢測試劑盒說明書 （貨號：WS4021F 分光法 48 樣） 一、產(chǎn)品簡介： 肌酐（Creatinine，CRE）是肌肉代謝的產(chǎn)物，主要通過腎小球濾過排出體外。在正常情況下， 體內(nèi)肌酐的含量基本穩(wěn)定。血液中的肌酐濃度可作為檢測腎小球濾過功能的指標(biāo)之一。 本試劑盒利用肌酐酶特異作用于肌酐生成肌酸，肌酸在肌酸酶和肌氨酸氧化酶的相繼作用下 生成過氧化氫，過氧化氫與顯色劑反應(yīng)呈現(xiàn)紫色，該有色物質(zhì)在546nm有吸收峰，進(jìn)而計 算得到肌酐含量。 二、試劑盒組分與配制： 試劑名稱 規(guī)格 保存要求 備注 試劑一 液體 17.5mL×1 瓶 4℃保存 試劑二 液體 6mL×1 瓶 4℃保存 標(biāo)準(zhǔn)管 粉體 2mg×1 支 4℃保存 用前甩幾下使粉體落入底部，再加 1mL蒸餾水溶解即標(biāo)準(zhǔn)品濃度為 2mg/mL，再用蒸餾水稀釋40倍 （1:39份水）成0.05mg/mL，即 442μmol/L的肌酐標(biāo)準(zhǔn)品待檢液。 三、所需儀器和用品： 可見分光光度計、1mL 玻璃比色皿（光徑 1cm）、可調(diào)式移液器、離心機(jī)、蒸餾水。 四、肌酐含量檢測： 建議正式實驗前選取 2 個樣本做預(yù)測定，了解本批樣品情況，熟悉實驗流程，避免實驗樣本 和試劑浪費！ 1、樣本制備： ① 組織樣本： 取約 0.1g 組織樣本，加 1mL 的提取液研磨，粗提液全部轉(zhuǎn)移到 EP 管中，12000rpm，常溫 離心 10min，上清液待測。 ② 液體樣品：澄清的液體可直接檢測；若渾濁則離心后取上清液檢測。 2、上機(jī)檢測： ① 可見分光光度計預(yù)熱 30min，設(shè)置溫度在 37℃，設(shè)定波長到 546nm。 ② 做實驗前選取 2 個樣本，找出適合本次檢測樣本的稀釋倍數(shù) D。 ③ 所有試劑解凍至室溫，在 1mL 玻璃比色皿（光徑 1cm）中依次加入： 試劑名稱（μL） 測定管 空白管 （僅做一次） 標(biāo)準(zhǔn)管 （僅做一次） 樣本 30 蒸餾水 200 230 200 標(biāo)準(zhǔn)品 30 試劑一 350 350 350 混勻，37℃孵育 5min，于 546nm 處讀取吸光值 A1。 試劑二 120 120 120本試劑盒僅供科研使用 2 混勻，37℃孵育 5min 后于 546nm 處讀取吸光值 A2， △A=A2-A1。 【注】：1. 測定管的 A 大于 0.8，須用蒸餾水對樣本進(jìn)行稀釋，稀釋倍數(shù) D 代入計算公式。 2. 若△A 的值小于 0.005，可增加樣本加樣體積 V1（如由 30μL 增至 60μL 或更多，則試蒸餾水相 應(yīng)減少，空白管和標(biāo)準(zhǔn)管不變），或增加樣本取樣質(zhì)量 W；則改變后的 V1 和 W 需代入公式重新 計算。 五、結(jié)果計算： 1、按照質(zhì)量計算： 肌酐含量(nmol/g)=(C 標(biāo)準(zhǔn)×V2)×(△A 測定-△A 空白)÷(△A 標(biāo)準(zhǔn)-△A 空白)÷(V1÷V×W)×D =442×(△A 測定-△A 空白)÷(△A 標(biāo)準(zhǔn)-△A 空白)÷W×D 2、按照體積計算： 肌酐含量(μmol/L)=(C 標(biāo)準(zhǔn)×V2)×(△A 測定-△A 空白)÷(△A 標(biāo)準(zhǔn)-△A 空白)÷V1×D =442×(△A 測定-△A 空白)÷(△A 標(biāo)準(zhǔn)-△A 空白)×D C 標(biāo)準(zhǔn)---肌酐標(biāo)品，0.05mg/mL=442μmol/L=442nmol/mL； V1---加入樣本體積，0.03mL； V2---加入標(biāo)準(zhǔn)品體積，0.03mL； V---提取液體積，1mL； Mr---肌酐分子量，113； W---質(zhì)量，g； D---稀釋倍數(shù)，未稀釋即為 1。