亞鐵含量檢測試劑盒（亞鐵嗪比色法）

亞鐵含量檢測試劑盒（亞鐵嗪比色法）

亞鐵含量檢測試劑盒（亞鐵嗪比色法）

本試劑盒僅供科研使用 1 亞鐵含量（亞鐵嗪比色法）檢測試劑盒說明書 （貨號：WS7121F 分光法 48 樣） 一、產品簡介： 亞鐵即二價鐵可與亞鐵嗪生成紫紅色化合物，該有色物質在 562nm 處有特征吸收峰， 進而計算得出亞鐵含量。適用于檢測組織、血清等樣品中的亞鐵含量。 二、試劑盒組分與配制： 試劑名稱 規格 保存要求 備注 提取液 液體 60mL×1 瓶 4℃保存 試劑一 液體 26mL×1 瓶 4℃保存 試劑二 粉體×2 支 4℃保存 用前甩幾下或離心使粉體落入底部，每支 再加入 1.2mL 的蒸餾水溶解備用。 試劑三 液體 2mL×1 支 4℃保存 標準品 液體 1mL×1 支 4℃保存 臨用前用試劑三稀釋 50 倍(即取 10μL 的 標準品至 EP 管中，再加 490μL 的試劑三)， 制備成 2μg/mL 的亞鐵標準品。 三、所需儀器和用品： 可見分光光度計、1mL 玻璃比色皿（光徑 1cm）、可調式移液器、離心機、蒸餾水。 四、亞鐵含量檢測： 建議正式實驗前選取 2 個樣本做預測定，了解本批樣品情況，熟悉實驗流程，避免實 驗樣本和試劑浪費！ 1、 樣本制備： ① 組織樣本： 取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液，進行冰浴勻漿。4℃×12000rpm 離心 5min，取 上清，置冰上待測。 【注】：若增加樣本量，可按照組織質量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例進行提取。 ② 細菌/細胞樣本： 先收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；取約 500 萬細菌或細胞加入 1mL 提取液，超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復 30 次）； 12000rpm 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。 【注】：若增加樣本量，可按照細菌/細胞數量（104）：提取液(mL)為 500~1000：1 的比例進行提取。 ③ 液體樣本：澄清的液體可直接檢測；若渾濁則離心后取上清液檢測。 2、上機檢測： ① 可見分光光度計預熱 30min，設定波長到 562nm，蒸餾水調零。 ② 所有試劑解凍至室溫，在 EP 管中依次加入：本試劑盒僅供科研使用 2 【注】：若 A 測定管大于 0.8，可用蒸餾水對樣本上清液進行稀釋，稀釋倍數 D 代入計算公式。 五、結果計算： 1、按照組織質量計算： 亞鐵含量(μg/g)=(C 標準×V1)×(A 測定-A 空白)÷(A 標準-A 空白)÷(V1÷V×W)×D =2×(A 測定-A 空白)÷(A 標準-A 空白) ÷W×D 亞鐵含量(nmol/g)= (C 標準×V1)×(A 測定-A 空白)÷(A 標準-A 空白)÷(V1÷V×W) ×103÷Mr×D =35.81×(A 測定-A 空白)÷(A 標準-A 空白) ÷W×D 2、按細胞數量計算： 亞鐵含量(μg/104 cell)=(C 標準×V1)×(A 測定-A 空白)÷(A 標準-A 空白)÷(V1÷V×細胞數量) ×D =2×(A 測定-A 空白)÷(A 標準-A 空白) ÷細胞數量×D 亞鐵含量(nmol/104 cell)=(C 標準×V1)×(A 測定-A 空白)÷(A 標準-A 空白)÷(V1÷V×細胞 數量) ×103÷Mr×D =35.81×(A 測定-A 空白)÷(A 標準-A 空白) ÷細胞數量×D 3、按照液體體積計算： 亞鐵含量(μg/mL)=(C 標準×V1)×(A 測定-A 空白)÷(A 標準-A 空白)÷V1×D =2×(A 測定-A 空白)÷(A 標準-A 空白)×D 亞鐵含量(μmol/L)=(C 標準×V1)×(A 測定-A 空白)÷(A 標準-A 空白)÷V1×103÷Mr×D =35.81×(A 測定-A 空白)÷(A 標準-A 空白)×D C 標準---鐵標品濃度，2μg/mL； V1---加入樣本體積，0.24mL； V---提取液體積，1mL； W---樣本取樣質量，g； D---稀釋倍數，未稀釋即為 1； Mr---亞鐵分子量，55.847。 試劑名稱（μL） 測定管 標準管 （僅做一次） 空白管 （僅做一次） 樣本 240 標準品 240 蒸餾水 240 試劑一 520 520 520 試劑二 40 40 40 充分混勻，置室溫 15min 后，若渾濁則需 3000rpm 離心 5min 后取全部上清液至 1mL 玻璃比色皿（光徑 1cm）中，于波長 562nm 處讀取各管吸光度 A。